[发明专利]提高豌豆耐冷耐湿性的微生物菌剂及其应用

权利要求书

1.提高豌豆耐冷耐湿性的微生物菌剂，其特征在于，所述微生物菌剂的活性成分为植物乳杆菌YuN21和根瘤菌，所述植物乳杆菌YuN21的分类名为Lactobacillus plantarum，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏日期为2018年02月06日，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCC NO.15346。

2.根据权利要求1所述的提高豌豆耐冷耐湿性的微生物菌剂，其特征在于，所述植物乳杆菌YuN21和根瘤菌的集落形成单位数目比为1:2。

3.权利要求1-2中任一项所述的提高豌豆耐冷耐湿性的微生物菌剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）菌株的活化：取-20℃条件下保存的植物乳杆菌YuN21，于MRS固体培养基上划线，温度37℃的条件下培养10~12小时，将培养的单菌落挑出，接种于MRS液体培养基中，在温度37℃的条件下培养8~10小时，得到活化的乳杆菌；此时，每毫升MRS液体培养基中至少含有1×10⁷ cfu乳杆菌，为乳杆菌的一级培养菌；

（2）微生物菌剂的制备：将活化培养好的植物乳杆菌YuN21和根瘤菌按cfu比1:2进行混合，按10%的接种量把混合菌液放入MRS液体培养基中进行发酵培养，温度30℃的条件下培养18-22小时，得到发酵的微生物菌剂。

4.根据权利要求3所述的提高豌豆耐冷耐湿性的微生物菌剂的制备方法，其特征在于，所述MRS液体培养基每升的组成及含量为：豌豆粉30 g/L、乳糖 15 g/L、柠檬酸氢二铵 2g/L、L-半胱氨酸盐酸盐 0.05 g/L、血红素0.5 g/L、碳酸钙10 g/L、K₂HPO₄ 2 g/L、MgSO₄·7H₂O 0.58 g/L、MnSO₄·H₂O 0.25 g/L、Tween-80 1ml/L，pH值为6.4，121℃灭菌15分钟；所述MRS固体培养基每升的组成及含量为：上述MRS液体培养基中加入质量百分比1.5%的琼脂粉，调pH值为6.4，121℃灭菌15分钟。

5.根据权利要求3所述的提高豌豆耐冷耐湿性的微生物菌剂的制备方法，其特征在于，每l升微生物菌剂中至少含有1 × 10¹⁰ cfu活菌。

6.权利要求1-2任一项所述微生物菌剂或权利要求3-5任一项所述制备方法制备得到的微生物菌剂在提高豌豆耐冷耐湿性中的应用。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，豌豆播种前2-3天，选取籽粒饱满、无虫蛀粒的豌豆为种子，将豌豆种子浸没入所述微生物菌剂的菌液中，浸泡30-35 min取出，于通风处晾干后，于田间播种。