[发明专利]水稻OsRR22-7

权利要求书

1.一种从理化诱变样本中鉴定是否含水稻OsRR22^-7突变型基因的方法，其特征在于，包括以下步骤：

a）通过非致死剂量的理化诱变方式对水稻进行诱变，获得水稻材料M1代；

b）将获得的M1代的植株分单株进行种植，并取各种植后单株上的叶片，将各单株的叶片混合；

c）对混合后的全部叶片材料提取出混池DNA；

d）对提取的混池DNA进行水稻OsRR22基因区域的高深度靶向测序；

e）将高深度靶向测序结果与所述水稻OsRR22^-7突变型基因的相关序列进行比对，鉴定高深度靶向测序结果中的群体性DNA样品是否存在水稻OsRR22^-7突变型基因；

如果含有水稻OsRR22^-7突变型基因则可进行后续筛选操作获得相应突变体，否则终止操作；

所述后续筛选操作还包括利用以下任意一种或多种方式对所述步骤e）的鉴定结果进行验证，验证样品中是否存在水稻OsRR22^-7突变型基因，所述验证方式具体包括：

e₁：数字PCR鉴定方式对全部植株进行检测验证；

e₂：通过KASP分型方式对每个单株进行分型验证；

e₃：通过一代测序方式对每个单株进行验证；

所述OsRR22^-7突变型基因相比日本晴水稻的OsRR22基因序列，包含有以下碱基缺失段，即：

在日本晴水稻第6号染色体的4140861-4140867位置存在[CGGCTTT/-]7个bp的缺失；

所述的水稻OsRR22^-7突变型基因具有SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述验证方式具体包括：

e₁：数字PCR鉴定方式对全部植株进行检测验证；

e₂：通过KASP分型方式对每个单株进行分型验证。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述验证方式包括以下两步：

1）先采用数字PCR鉴定方式对高深度靶向测序结果中的群体性DNA进行检测，鉴定群体性DNA样品中是否存在OsRR22^-7基因的目标SNP和/或Indel；若存在则执行以下第2）步，否则终止；

2）再针对数字PCR鉴定存在的SNP和/或Indel位点，利用KASP分型引物，对含有该突变的混池样本所对应的群体，分单株进行KASP基因分型，最终确定是否含有水稻OsRR22^-7突变型基因的嵌合体单株。

4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述KASP分型的分型引物包含以下序列：

FAM 5-’GAAGGTGACCAAGTTCATGCTGCAAGCTCCTGAAGTCCGAA-’3；

HEX 5-’GAAGGTCGGAGTCAACGGATTCAAGCTCCTGAAGTCCGCG-’3；

COMMON 5-’TTCTGCTGCTCTTCCATCTTTCA-’3。