[发明专利]一种三聚氰胺上转换荧光探针的制备方法及其应用

说明书

本发明涉及一种三聚氰胺上转换荧光探针的制备方法及其应用：首先取6mg上转换纳米材料超声溶解于3mL MES缓冲溶液中；取1.756mg EDC和2.6mg NHS加入到上述MES溶液中，室温条件下，均匀搅拌反应4h；然后离心分离沉淀物，沉淀产物用去离子水洗涤3次(离心操作)；用1mL HEPES缓冲液将上述产物复溶，加入三聚氰胺多克隆抗体，4℃反应4h；然后取10mg BSA加入到上述混合溶液中，室温搅拌反应1h。并用去离子水洗涤3次，最后复溶于1mL HEPES溶液中，最终得到三聚氰胺上转换荧光探针。本发明优点是：本文合成了上转换荧光探针，并应用于牛奶及乳制品中三聚氰胺的检测。以荧光性能良好的上转换纳米材料作为荧光标记物，合成荧光探针，实现了荧光信号值的放大。

技术领域

本发明属于光学传感材料制备技术及免疫分析技术研究领域，具体是一种 三聚氰胺上转换荧光探针的制备方法及其应用在牛奶及乳制品中检测三聚氰胺。

背景技术

三聚氰胺，属于三嗪类含氮杂环有机化合物，是一种用途广泛的有机化工中 间体。人如果长期摄入三聚氰胺会造成泌尿系统损害，导致膀胱及肾部的结石， 并诱发肿瘤。因此，食品中三聚氰胺定量检测对食品安全有重要意义。目前，国 内外普遍采用检测三聚氰胺的方法有高效液相色谱法、气相色谱—质谱联用法和 液相色谱—质谱联用法、酶联免疫吸附法及免疫层析法等。但这些方法操作复杂、 需要昂贵的仪器、专业的技术人员及众多辅助设备，且检测灵敏度相对较低，尤 其是液态奶中的其他组分对测定结果具有干扰性，因此这些方法在食品安全分析 技术领域具有一定的局限性。近年来，荧光免疫分析法已受到国内外研究学者的 广泛关注，该方法是将免疫学反应的特异性和荧光技术的敏感性有效结合起来的 一种方法。其性能主要依赖于信号标记物的荧光强度以及识别分子的特异性和稳 定性。目前作为标记物的荧光基团种类很多，包括传统的荧光染料、量子点和其 他多种荧光纳米材料。但大多数荧光染料性质不稳定易于被光漂白，影响检测灵 敏度。

上转换纳米材料是将稀土金属元素掺杂于纳米晶体的晶格中，在近红外激光 的激发下可以发射可见光区或近红外光区的荧光。特别是上转换纳米材料具有优 异的光学性质，如大斯托克斯位移、窄发射、长荧光寿命、低毒性、良好的 光漂白性、无检测本底干扰，同时，可以通过改变掺杂稀土离子的种类和比 例改变发射光波长范围，获得不同荧光发射的纳米颗粒。因此，可以作为新 型标记物在食品安全分析领域具有广泛的应用前景。

本发明所合成的上转换荧光探针具有荧光强度高、选择性好、灵敏度高 和响应时间短等特点。本发明结合上转换荧光纳米材料的良好荧光性能和免 疫分析方法的高特异性，建立一种检测三聚氰胺的上转换荧光免疫检测方法， 用于牛奶及乳制品中三聚氰胺的定量检测。

发明内容

本发明的目的是根据上述问题，弥补现有技术不足，旨在提出了一种对 三聚氰胺具有高选择性的荧光探针，以用于牛奶及乳制品中三聚氰胺检测方 法的建立。

为达到上述目的，本发明创造的技术方法是这样实现的：

采用聚丙烯酸包裹的上转换纳米材料作为荧光标记物，合成一种特异性 识别三聚氰胺的荧光探针材料。

本发明的荧光探针对三聚氰胺可特异性识别。

本发明还公开了这种荧光探针的制备方法：

(1)制备疏水性的上转换纳米材料(OA-UCNPs)