[发明专利]一种三聚氰胺上转换荧光探针的制备方法及其应用

权利要求书

1.一种三聚氰胺上转换荧光探针的制备方法，其特征在于包括如下步骤：

(1)采用水热法合成了疏水性的上转换纳米材料OA-UCNPs

在总量为1mmol的反应体系中，准确称取醋酸钇264mg，醋酸镱76mg，醋酸铥8.36mg于100mL三颈瓶中，加入7mL油酸和15mL十八烯，之后将三颈瓶置于磁力电加热套上快速搅拌；在真空保护状态下，将上述反应混合物加热至100℃保持10min，之后通氩气，搅拌状态下将混合物快速加热至160℃反应30min，停止加热，待混合溶液自然冷却至室温；称取110mg的NH₄F，148mg的NaOH溶于12mL的甲醇溶液中，超声溶解后，将溶解好的混合液逐滴加入至上述混合液中，在室温下持续搅拌30min；随后，将该反应温度升至100℃抽真空10min，继续保持通氩气，将混合溶液迅速加热至305℃搅拌反应1h，使得溶剂中化合物充分反应；待反应结束后，待所得到的混合溶液自然冷却至室温，之后经离心处理，用乙醇将沉淀物反复离心洗涤三次，烘干后以获得疏水性的上转换纳米材料OA-UCNPs；

(2)采用配体交换法制备出亲水性上转换纳米材料PAA-UCNPs

向100mL的三颈瓶中加入30mL二甘醇，然后迅速加入1.5g的聚丙烯酸，氩气保护下，将混合物加热至110℃反应一个小时；称取30mg步骤(1)中的OA-UCNPs，加入2mL甲苯溶液，超声溶解后，快速加入到上述混合体系中，于110℃下持续搅拌反应1小时，之后加热至240℃保持1小时；待所得溶液冷却至室温后，转移至离心管中，加入过量稀盐酸溶液，经离心处理后，收集沉淀物并用超纯水离心洗涤，经干燥后获得亲水性上转换纳米材料PAA-UCNPs；

(3)三聚氰胺上转换荧光探针的制备：

称取6mg亲水性上转换纳米材料PAA-UCNPs，超声溶解于3mL2-(N-吗啉)乙磺酸缓冲溶液中；称取1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺1.756mg和N-羟基琥珀酰亚胺2.6mg分别溶解于250μL MES溶液中，迅速加入到上述混合溶液中，30℃反应4h；反应完毕后，离心分离沉淀，离心产物用去离子水离心洗涤3次；用1mL N-(2-羟乙基)哌嗪-N'-2-乙烷磺酸缓冲液将上述产物复溶，加入一定量的三聚氰胺多克隆抗体，4℃反应4h；反应完毕后，取10mg牛血清白蛋白加入到上述混合溶液中，30℃反应1h。然后离心收集沉淀产物，并用去离子水洗涤3次，最后复溶于1mL HEPES溶液中，最终得到三聚氰胺上转换荧光探针，干燥条件下保存。

2.根据权利要求1所述的一种三聚氰胺上转换荧光探针的制备方法，其特征在于，步骤(1)中四水合醋酸钇、四水合醋酸镱和四水合醋酸铥的摩尔质量比为78:20:2；步骤(2)中1.5g聚丙烯酸需溶解于30mL二甘醇中，加入OA-UCNPs的量为30mg，甲苯体积为2mL。

3.根据权利要求1所述的一种三聚氰胺上转换荧光探针的制备方法，其特征在于，步骤(3)中牛血清白蛋白的量为10mg，用于封闭上转换荧光探针上未与三聚氰胺抗体结合的位点。

4.权利要求1-3任一权利要求所述制备方法，其特征在于，得到的疏水性上转换纳米材料的平均粒径在25nm左右，亲水性的上转换纳米材料的平均直粒径28nm左右，蓝色荧光强度较强，荧光光谱特征峰在482nm处，980nm红外激发器激发。

5.权利要求1-3任一权利要求所述制备方法得到的上转换荧光探针用于三聚氰胺的检测。