[发明专利]一种用于人肝素结合蛋白检测的试剂盒及其制备方法

说明书

本申请公开了一种用于人肝素结合蛋白检测的试剂盒及其制备方法。本申请的试剂盒，用于胶乳增强免疫比浊法检测，试剂盒包括试剂1、试剂2和校准品，其中，试剂2包含标记HBP单抗的大球胶乳微球和标记HBP单抗的小球胶乳微球，大球胶乳微球与小球胶乳微球的粒径差值至少为200nm，小球胶乳微球与大球胶乳微球的表面电荷差值至少为100μeq/g。本申请的试剂盒，同时采用粒径差值至少200nm、表面电荷差值至少100μeq/g的大球和小球胶乳微球进行HBP单抗标记，用于胶乳增强免疫比浊法检测，不仅能提高检测灵敏度，而且可以获得更宽的检测线性范围，为HBP临床检测提供了一种高灵敏度、全量程的检测试剂盒。

技术领域

本申请涉及人肝素结合蛋白检测领域，特别是涉及一种用于人肝素结合蛋白检测的试剂盒及其制备方法。

背景技术

人肝素结合蛋白(Heparinbinding protein,HBP)是中性粒细胞来源的颗粒蛋白，主要由多核中性粒细胞(polymorphonuclearneutrophils,PMN)受外界刺激所释放，正常人血中HBP含量很低，一般不超过10ng/mL。当有感染发生时，部分细菌侵入到血管内，菌体本身或细菌释放的毒素等物质刺激中性粒细胞释放HBP，从而导致血液中HBP含量升高。HBP在一般感染时能达到20-30ng/mL。ICU中严重感染会更高，可超过100ng/mL，甚至达到1000ng/mL。

HBP可作为局部感染的诊断指标，辅助诊断尿道感染的指标，也可用于对感染性休克的预测和败血症中循环衰竭的预测。

目前，临床上将HBP≥15ng/mL作为严重败血症的指标。HBP具有出现早、灵敏度高、特异性强、阳性/阴性检出率高等优点。HBP只在急性细菌感染时浓度升高，在病毒感染和非特异性炎症时保持较低水平。传统炎症指标，如降钙素原、C反应蛋白、中性粒细胞、白细胞、乳酸等的影响因素较多，尤其是老年人常伴有免疫功能反应低下，这些传统炎症指标的升高水平不一定能精确反映病情的严重程度。

目前，用于HBP检测的方法主要有酶联免疫法(ELISA)、胶体金法、免疫荧光层析法和胶乳增强免疫比浊法等。欧洲Axis-Shield公司的酶联免疫试剂盒已被国家药监局批准上市，国械注进20162400300；酶联免疫分析法可以精确地检测样品中的肝素结合蛋白浓度，但ELISA法操作步骤复杂，耗时长，人为因素较多，容易引入误差，不能满足门诊或急诊的快速检测的要求。胶体金法和免疫荧光层析法，例如专利CN204882574U和CN204882575U，虽然可以快速检测HBP，但只能进行定性或者半定量的检测，精确度低，无法作为精确的临床诊断依据。

基于胶乳增强免疫比浊法的HBP检测试剂盒相对于其它检测方法而言，具有试剂盒组分简单、操作方便、检测快速等优点。一般来说，胶乳增强免疫比浊法的试剂盒中通常只需要包含用于样品处理的缓冲液试剂1(简写R1)，用于进行反应的试剂2(简写R2)，以及校准品即可进行HBP检测。使用时，先采用试剂1(R1)对待测样品进行恒温孵育，然后加入试剂2(R2)进行反应，测量反应过程中吸光度的变化，即可实现HBP检测。但是，胶乳增强免疫比浊法存在灵敏度低、检测线性范围不够宽等问题，例如专利申请CN107167589A和CN108152512A。为了解决灵敏度和检测线性范围的问题，专利申请CN109613259A将HBP单抗和HBP多抗分别标记在不同的胶乳微球上，希望通过HBP单抗和多抗的组合使用提高胶乳增强免疫比浊法的灵敏度和检测线性范围；但是，该专利申请中的灵敏度也只能达到1.00ng/mL，检测线性范围只能达到0.00-500.00ng/mL，不能涵盖超过500.00ng/mL的高浓度HBP。

因此，研发一种既能检测血清样本中HBP含量，又能检测血浆样本中HBP含量的高灵敏度、全量程的HBP检测方法或试剂盒在临床上有迫切需求。

发明内容

本申请的目的是提供一种新的用于人肝素结合蛋白检测的试剂盒及其制备方法。

为了实现上述目的，本申请采用了以下技术方案：