[发明专利]一种脂肪来源干细胞外泌体的制备方法和应用

说明书

本发明涉及干细胞外泌体的制备方法技术领域，且公开了一种脂肪来源干细胞外泌体的制备方法和应用，该脂肪来源干细胞外泌体的制备方法和应用，制备的外泌体采用常规方法，对外泌体进行流式细胞仪分析，数据用Flow Software7.6.1软件分析，结果表明，外泌体中CD29，CD44，CD90及CD105均为阳性表达，阳性率分别为97.7%，89.3%，97.1%及84.6%，CD34及CD45为阴性表达，阴性率分别为97.7%和92.7%，提高了后期的使用，解决了美容制剂其修复受损和抗衰老的效果不理想，以及普遍存在稳定性不佳，生产成本偏高的问题，从而达到提高其修复受损和抗衰老的效果，提高稳定性和降低生产成本的目的。

技术领域

本发明涉及干细胞外泌体的制备方法技术领域，具体为一种脂肪来源干细胞外泌体的制备方法和应用。

背景技术

间充质干细胞是重要的种子细胞之一，具有自我更新和多向分化潜能，其遗传信息稳定，可通过较简单的方法大量提取。与其他间充质干细胞的来源相比，脂肪组织是来源更丰富、可消耗且容易获得的组织，因此，脂肪间充质干细胞逐渐成为干细胞研究的新宠，对脂肪间充质干细胞的研究也越来越多。但是，由于脂肪间充质干细胞储存条件较苛刻，运输不便，临床应用较困难。

外泌体是一种经细胞内体途径生成并释放到细胞外的囊性小泡，由磷脂双层膜包被，其内包裹脂质、蛋白质、核酸等多种生物活性物质，电镜下观察呈杯状，是参与细胞间物质转运与信息传递的重要角色。新近研究表明，外泌体在细胞间信号通讯中发挥要作用，具有免疫调节、促进血管再生、以及介导细胞增殖、分化、迁移、凋亡等功能，维持机体的正常生理状态与参与疾病进程。其中间充质干细胞来源外泌体具有来源细胞特性，能促进受损区域细胞自我修复与组织再生，恢复组织内稳态，加速创面修复等功能。

人脂肪间充质干细胞分泌的外泌体，其结构稳定，不易分解，为脂肪间充质干细胞在临床应用提供了新的可能性。

而传统的外泌体制备技术，包括超离、超滤、磁珠免疫、PEG沉淀法等，其制备的外泌体中CD29，CD44，CD90及CD105均为阳性表达，阳性率分别低于80%，CD34及CD45为阴性表达，阴性率分别低于90%,影响了后期的使用，而且现有许多美容制剂其修复受损和抗衰老的效果不理想。

发明内容

（一）解决的技术问题

针对现有技术的不足，本发明提供了一种脂肪来源干细胞外泌体的制备方法和应用，解决了现有设备制备的外泌体中CD29，CD44，CD90及CD105均为阳性表达，阳性率分别低于70.1，CD34及CD45为阴性表达，阴性率分别低于90%，而且美容制剂其修复受损和抗衰老的效果不理想，以及普遍存在稳定性不佳，生产成本偏高等情况的问题。

（二）技术方案

本发明提供如下技术方案：一种脂肪来源干细胞外泌体的制备方法和应用，所述制备方法至少包括如下步骤：

（1）对人脂肪间充质干细胞进行培养，培养阶段在细胞培养基中添加诱导剂；

（2）对培养后的干细胞进行预处理；

（3）在预处理后的培养基上清液中提取所述的人脂肪间充质干细胞源外泌体；

（4）外泌体制剂的制备。

优选的，所述外泌体为间充质干细胞分化而来。

优选的，所述间充质干细胞源为人脂肪间充质干细胞。

优选的，还包括一种人脂肪间充质干细胞的培养方法：

（1）取吸脂术后脂肪30mL，用含青霉素-链霉素双抗的PBS冲洗3遍，去除筋膜及红细胞后，加入30ml的0.075%Ⅰ型胶原酶[7-11]，在37℃、150r/min的条件下，消化,40-45min；