[发明专利]同时检测血液中氯米帕明和N-去甲氯米帕明含量的方法

权利要求书

1.同时检测血液中氯米帕明和N-去甲氯米帕明含量的方法，其特征在于，包括：

配制至少三个标准工作液，其中，标准工作液中含有浓度已知的氯米帕明标准品和N-去甲氯米帕明标准品，不同标准工作液中同一标准品的浓度不同；标准工作液的稀释液为40-60％的甲醇水溶液；

将一定量的标准工作液、内标工作液和空白血液样本混合，进行样本前处理，得到标准溶液，其中，内标工作液中含有浓度已知的内标物；标准工作液的用量为10 μL、内标工作液的用量为10 μL，空白血液样本的用量为150-250 μL，

利用高效液相色谱仪，在一定检测条件下，分别检测至少三个标准溶液，得到各个标准溶液的色谱图；

根据各个标准溶液的色谱图，拟合得到氯米帕明的标准曲线方程和N-去甲氯米帕明的标准曲线方程；

将一定量的内标工作液和血液样本混合，内标工作液的用量为10 μL，血液样本的用量为150-250 μL，进行同样的样本前处理，得到待测样本，其中，血液样本经处理待检测血液而得到；

利用高效液相色谱仪，在相同检测条件下检测待测样本，得到待测样本的色谱图；

根据待测样本的色谱图和拟合得到的各个标准曲线方程，计算血液样本中氯米帕明和N-去甲氯米帕明的含量；

所述进行样本前处理，包括下述A1至A5：

A1包括：将混合液在转速为1800-2800rpm下涡旋混匀1-2min；

A2包括：加入80-120μL甲醇，在转速为1800-2800rpm下涡旋混匀1-2min；

A3包括：加入800-1200μL萃取剂，在转速为1800-2800rpm下涡旋混匀15-25min后，再在10000-15000rpm的转速下离心3-7min，得到上清液；

A4包括：移取700-1000μL上清液于离心管中，在常温下用氮气吹干；

A5包括：向上清吹干的离心管中加入80-120μL复溶液，在1800-2800rpm转速下涡旋混匀2-4min后，再在10000-15000rpm的转速下离心4-6min，得到上清液；复溶液为40-60％的甲醇水溶液；

所述检测条件包括：Waters XbridgeC18色谱柱，色谱柱的长度为150 mm、内径为2.1mm、填料粒径为3.5 μm；柱温为50-60℃，流动相A为含浓度为80-120 mmol/L的乙酸铵、体积比为0.15-0.25％的甲酸、体积比为0.15-0.25％的三乙胺的水，流动相B为乙腈，流速为0.2-0.4 mL/min，进样量为20-40 μL，分析时间为12-13 min；检测波长为295-305nm；

所述检测条件包括：单柱双泵洗脱模式；

双泵切换方式为：在10.7min从分析泵切换为清洁泵，在11.2min从清洁泵切换为分析泵；

洗脱方式为：流动相A和流动相B的体积比，在10.7-11.2 min之外的其他洗脱时间范围内为59-61％：41-39％。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述高效液相色谱仪中的紫外检测器为DAD-3000检测器，采集频率为5Hz，带宽为4nm。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述高效液相色谱仪所使用的在线过滤器为SSI COL PRE-FILTERWATER 1/16 0.5M。

4.根据权利要求1中任一所述的方法，其特征在于，内标物为亚氨基芪。

5.根据权利要求1至4中任一所述的方法，其特征在于，所述标准工作液中，氯米帕明标准品的浓度为500-15000ng/mL，N-去甲氯米帕明标准品的浓度为1000-30000ng/mL。