[发明专利]一种猪卵母细胞体外成熟培养液及其制备方法与应用

权利要求书

1.一种猪卵母细胞体外成熟培养液，其特征在于，所述猪卵母细胞体外成熟培养液含有单宁酸；所述培养液由基础培养液TCM-199，质量浓度为0.066g/L的青霉素，质量浓度为0.08g/L的链霉素，浓度为2mmol/L的NaHCO3，浓度为9.5mmol/L的4-羟乙基哌嗪乙磺酸Hepes，质量浓度为3.5g/L的聚乙烯醇，浓度为0.9mmol/L的丙酮酸钠，质量浓度为8ng/mL的胰岛素，浓度为0.7mmol/L的半胱氨酸，质量浓度为12ng/mL的表皮生长因子，体积浓度为75mL/L的猪卵泡液，浓度为8IU/mL的孕马血清促性腺激素PMSG，浓度为12IU/mL的人绒毛膜促性腺激素hCG和浓度为50μg/mL的单宁酸组成。

2.如权利要求1所述的猪卵母细胞体外成熟培养液的制备方法，其特征在于，具体步骤如下：

(1)猪卵泡液的获取：从猪卵巢的卵泡中抽出液体，对所述液体进行离心，保留上清液，对上清液进行过滤除杂，获得猪卵泡液；

(2)将TCM-199，青霉素，链霉素，NaHCO3，Hepes，聚乙烯醇，丙酮酸钠，胰岛素，半胱氨酸，表皮生长因子，PMSG，hCG，单宁酸和步骤(1)所获得的猪卵泡液混合，获得培养液粗液；

(3)对步骤(2)所获得的培养液粗液过滤除菌，获得所述的猪卵母细胞体外成熟培养液。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述的猪卵巢温度是28-35℃。

4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述的离心是4-6℃条件下，12000-14000r/min，离心30-60min。

5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述的过滤除杂是用0.45μm的滤器进行过滤。

6.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤(3)所述的过滤除菌是用0.22μm的滤器进行过滤。

7.权利要求1所述的猪卵母细胞体外成熟培养液在体外培养猪卵母细胞上的应用。