[发明专利]一种同时检测多种病原微生物的引物探针组合、试剂盒以及方法

说明书

本发明提供一种同时检测多种病原微生物的引物探针组合、试剂盒以及方法，包括：用于检测呼肠孤病毒的引物对、探针序列如SEQ ID NO：1‑3所示；用于检测牛细小病毒的引物对、探针序列如SEQ ID NO：4‑6所示；用于检测蓝舌病毒的引物对、探针序列如SEQ ID NO：7‑9所示；用于检测牛腹泻病毒的引物对、探针序列如SEQ ID NO：10‑12所示；用于检测牛多瘤病毒的引物对、探针序列如SEQ ID NO：13‑15所示；以及用于检测狂犬病毒的引物对、探针序列如SEQ ID NO：16‑18所示。根据本发明，提供了一种简单、快速、灵敏度高同时检测多种病原微生物的引物探针组合、试剂盒和方法。

技术领域

本发明涉及微生物检测技术领域，更具体地涉及一种同时检测多种病原 微生物的引物探针组合、试剂盒以及方法。

背景技术

生物制品的出现对人类的健康和生活质量的提高有非常特殊的意义。随 着我国生物医药的发展，对血清的需求以每年25％的速度增长，对外依存度越 来越高。牛血清在疫苗生产中被大量使用，其质量直接影响生物制品的质量安 全，特别是病毒类生物活性物质污染会严重影响制品的质量安全。日本东京大 学的Harasawa等报道，在5批人用麻风腮及风疹疫苗成品中检出了牛腹泻病 毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)RNA。Wessman等报道，由于使用了污染 BVDV的胎牛血清，已经导致了胎牛肾细胞、牛肾细胞、牛鼻甲骨细胞、猪肾 细胞、猫肾细胞核Vero细胞等多种细胞系的污染。

牛腹泻病毒是疫苗生产中常见的污染物及严重的外源性致病原之一，因 此牛血清中BVDV的检测尤为重要。此外，呼肠孤病毒(reoviridae,REOV)、 牛细小病毒(bovineparvovius,BPV)、蓝舌病毒(bluetongue virus,BTV)、牛多瘤 病毒(bovine ploymavirus,BPyV)、狂犬病毒(Rabies virus,RABV)也是牛血清中 重要的病原外源因子，由于牛血清质量的把关是生物制品质量的重要环节，因 此建立外源性病毒快速检测方法，将有助于把控牛血清质量，防止外源病毒的 污染。

然而，传统的检测方法一次只能检测单一病原，因此建立快速的、高通 量检测方法对于把关生物制品的安全至关重要。如今研究的趋势更是进一步转 向了在一个检测平台上同时检测多种病原微生物或者检测多种动物的同一病 原微生物，以此缩短检测周期、减少检测成本。因此，能同时快速有效检测多 种病原微生物的高通量检测技术已成为生物制品病原检测和公共安全等领域 研究的热点。

发明内容

本发明的目的是提供一种同时检测多种病原微生物的引物探针组合、试 剂盒以及方法，从而解决现有技术中缺乏能够快速有效同时检测呼肠孤病毒、 牛细小病毒、蓝舌病毒、牛腹泻病毒、牛多瘤病毒、狂犬病毒的方法的问题。

为了解决上述技术问题，本发明采用以下技术方案：

根据本发明的第一方面，提供一种同时检测多种病原微生物的引物探针 组合，该引物探针组合包括：用于检测呼肠孤病毒的如SEQ ID NO：1-2所示 的特异性引物对，如SEQID NO：3所示的特异性探针；用于检测牛细小病毒 的如SEQ ID NO：4-5所示的特异性引物对，如SEQ ID NO：6所示的特异性 探针；用于检测蓝舌病毒的如SEQ ID NO：7-8所示的特异性引物对，如SEQ ID NO：9所示的特异性探针；用于检测牛腹泻病毒的如SEQ ID NO：10-11所示的特异性引物对，如SEQ ID NO：12所示的特异性探针；用于检测牛多 瘤病毒的如SEQID NO：13-14所示的特异性引物对，如SEQ ID NO：15所示 的特异性探针；以及用于检测狂犬病毒的如SEQ ID NO：16-17所示的特异性 引物对，如SEQ ID NO：18所示的特异性探针。

优选地，所述特异性探针的5’端修饰的活性有机基团为氨基。