[发明专利]一种检测沙门氏菌毒素的塑封胶体金检测卡

说明书

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种检测沙门氏菌毒素的塑封胶体金检测卡及其制备方法。所述检测卡包括试纸条，所述试纸条包括背板、样品垫、胶体金垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，所述样品垫、胶体金垫、硝酸纤维素膜和吸水垫在背板上按顺序依次固定，所述胶体金垫内含有胶体金标记抗沙门氏菌毒素抗原的单克隆抗体；所述硝酸纤维素膜上设有检测线和质控线。通过本工艺的实施，开发出沙门氏菌毒素快速免疫检测卡的快速生产制备技术。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种检测沙门氏菌毒素的塑封胶体金检测卡及其制备方法。

背景技术

根据WHO估计，发达国家食源性疾病的漏报率在90％以上，而发展中国家则为95％以上。以此推论，我国目前掌握的食物中毒数据仅为我国实际发生的食源性疾病的“冰山一角”。而如此高的漏报率，除管理上的问题外，致病微生物的检测和溯源手段的限制也是一个重要因素。当前细菌性食物中毒主要有感染型中毒和毒素型中毒两种。沙门氏菌及其毒素是一种常见的食源性致病原。

目前我国食品安全研究队伍、设备和经费都十分缺乏，与国外相比，仍具有较大差距，主要表现在检测项目少、质量不稳定，不能满足食品检测工作的要求。严峻的现实向微生物检测提出了更高的要求―更准确、更快速地检出与监测病原菌。

传统上我国食源性疾病的病原检测、鉴定手段仍停留在传统的病原菌培养，此检验法的最大弱点是慢，难以适应诊断与治疗，主要包括两种方法：一是PCR分子鉴定技术检测病原菌，虽然灵敏度高、快速，可直接检测，但对实验室和试剂的要求比较高，否则结果十分不可靠；二是酶联免疫法(ELISA)检测虽是一项比较成熟的免疫分析技术，但该法操作比较繁琐，检测时间长，并需在实验室进行，不能满足现场快速检测的需求。因此，目前病原微生物检测方法的落后性在相当大的程度上限制了对引起食源性疾病的病原菌的溯源及鉴定能力。而当发生食物中毒事件时，由于中毒潜伏期短，来势急剧，短时间内可能有多数人发病，发病曲线呈突然上升的趋势，只有在最短时间内掌握食物中毒发生情况，确定中毒原因，才能控制食物中毒的蔓延和事态的扩大，保障人民身体健康。因此，开发应用于现场的快速、灵敏的食品安全检测技术平台是今后食品安全检测的趋势。

发明内容

本发明提供了一种检测沙门氏菌毒素的塑封胶体金检测卡及其制备方法，通过本工艺的实施，开发出沙门氏菌毒素快速免疫检测卡的快速生产制备技术。

本发明通过以下技术方案来实现：

一种检测沙门氏菌毒素的塑封胶体金检测卡，所述检测卡包括试纸条，所述试纸条包括背板、样品垫、胶体金垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，所述样品垫、胶体金垫、硝酸纤维素膜和吸水垫在背板上按顺序依次固定，所述胶体金垫内含有胶体金标记抗沙门氏菌毒素抗原的单克隆抗体；所述硝酸纤维素膜上设有检测线和质控线。

进一步的，所述试纸条通过冷裱塑封。

进一步的，所述检测卡上设置有样本孔，所述样本孔位于样品垫正上方。

一种检测沙门氏菌毒素的塑封胶体金检测卡制备方法，包括以下步骤：

沙门氏菌毒素抗原提纯；

利用提纯后的抗原进行沙门氏菌毒素的单克隆抗体制备及筛选；

胶体金标记抗体制备；

组装检测卡。

进一步的，所述胶体金标记抗体制备方法包括：

将抗体置于透析袋中，透析掉多余的盐离子透析掉；从透析袋中取出抗体，离心后除去多余的抗体聚合物，取上清液和胶体金连接进行标记；

加入碳酸钾溶液调节胶体金溶液的pH值，将抗体溶液逐滴地加入到胶体金溶液中，快速混匀，将混合后的溶液静置；

加入BSA溶液和PEG20000溶液，以封闭金颗粒的表面的残留表位使颗粒聚集，继续静置；