[发明专利]Azaphilone类螺环化合物及其制备方法与应用

说明书

本发明公开了Azaphilone类螺环化合物及其制备方法与应用，属于微生物技术领域。本发明Azaphilone类螺环化合物的结构式为本发明利用化学表观遗传修饰剂烟酰胺修饰拟茎点霉菌株YE3250，从拟茎点霉菌株YE3250的发酵产物中提取。本发明的Azaphilone类螺环化合物在对α‑葡萄糖苷酶活性检测和抗植物病原真菌的活性检测中，均显示明显的抑制作用，可用于制备新的防治糖尿病药物或抗真菌农用抗生素。

技术领域

本发明涉及Azaphilone类螺环化合物及其制备方法与应用，属于微生物技术领域。

背景技术

植物内生真菌具有强大的生物合成能力，是药物先导化合物的重要来源，但在纯培养条件下许多基因簇处于沉默状态而不表达产生相应产物。近年研究表明，化学表观遗传修饰方法可通过小分子化学物质抑制真菌中影响表观遗传的酶类，激活沉默的生物合成基因，诱导真菌产生新活性化合物，增加菌株次级代谢产物的结构多样性。

拟茎点霉属是植物内生真菌中的常见类群，其次级代谢产物的结构类型多样，并且具有多种生物活性，对于微生物来源的药物先导化合物的发现具有较高的研究价值。至今尚未见化学表观遗传修饰方法用于拟茎点霉属真菌次级代谢产物的研究报道。

发明内容

针对现有技术中化学表观遗传修饰方法用于拟茎点霉属真菌次级代谢产物的问题，提供了Azaphilone类螺环化合物及其制备方法与应用，本发明利用化学表观遗传修饰剂烟酰胺修饰拟茎点霉菌株YE3250，从拟茎点霉菌株YE3250的发酵产物中提取Azaphilone类螺环化合物。

Azaphilone类螺环化合物，结构式如式(I)所示，

本发明利用化学表观遗传修饰剂烟酰胺修饰拟茎点霉菌株YE3250，从拟茎点霉菌株YE3250的发酵产物中提取Azaphilone类螺环化合物。

所述拟茎点霉菌株YE3250来源于滇牡丹(Paeonia delavayi Franch)植物，植物内生真菌Phomopsis sp.YE3250菌株，已于2012年9月19日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC No:M 2012364，公开于申请号为201210415385.9的专利中。

所述Azaphilone类螺环化合物的制备方法，具体步骤如下：

(1)将拟茎点霉菌Phomopsis sp.YE3250菌株接入PDB培养基，然后置于温度为28±2℃下摇床培养3～5d得到真菌种子液；

(2)将化学表观遗传修饰剂烟酰胺溶解于无菌水中，经微孔滤膜过滤得到烟酰胺溶液；

(3)将步骤(2)烟酰胺溶液加入到PDB发酵培养基中得到含化学表观遗传修饰剂的PDB发酵培养基，再将真菌种子液接种至PDB发酵培养基中，置于温度为28±2℃下摇床培养7～9d得到发酵混合物；

(4)将步骤(3)发酵混合物过滤得到发酵液和菌丝体，采用乙酸乙酯萃取发酵液得到乙酸乙酯萃取液，采用乙醇提取菌丝体得到乙醇提取液，乙酸乙酯萃取液和乙醇提取液合并后经减压浓缩得到发酵粗提物，发酵粗提物经柱色谱分离纯化即得Azaphilone类螺环化合物。

进一步地，所述步骤(1)PDB培养基包括马铃薯、葡萄糖和蒸馏水，其中PDB培养基中马铃薯的浓度为0.2～0.4g/mL，葡萄糖的浓度为0.02～0.05g/mL。

进一步地，所述步骤(2)烟酰胺溶液中烟酰胺浓度为400～600mM。

进一步地，所述PDB发酵培养基与步骤(1)PDB培养基相同。

更进一步地，所述含化学表观遗传修饰剂的PDB发酵培养基中烟酰胺的浓度为200～300μM。