[发明专利]一种诱导低温弱光保存海带雄性种质发育的方法

说明书

本发明提供一种诱导低温弱光保存海带雄性种质发育的方法，即一种促进长期在低温弱光条件下保存海带雄性种质丝状体细胞快速发育成幼孢子体的方法。本发明的方法本发明是在丝状体片段阶段就提高到8000lx光照，针对不同发育时期，再逐渐降低到幼苗培育阶段的1000‑1500lx；刺激发育的温度为14℃；且在幼孢子体之前增加柠檬酸铁和维生素B12。本发明的方法可以有效的促进海带雄性种质的发育，再17‑20天即可使配子体细胞分裂产生幼孢子体；而且幼孢子体畸形率降低到40％‑60％。

技术领域

本发明属于海藻发育诱导技术领域，具体涉及一种诱导低温弱光保存海带雄性种质发育的方法。

背景技术

海带是具异型世代交替的大型经济褐藻，自然生长的海带生活史包括短期的配子体和长期的孢子体阶段，成熟海带孢子体放散产生游孢子，游孢子附着后发育为雌、雄配子体，而配子体分别产生精卵，卵子受精形成合子，合子发育为幼孢子体。

研究发现海带也存在雄性配子体细胞直接分裂发育成幼孢子体的情况，即无配生殖途径。我国的科研人员在1979年首次报道了海带的无配生殖途径，采集海带游孢子，经过3个多月发现部分雄配子的细胞膨大分裂成小孢子体。1997年发表的研究结果表明，经过2-3个月，采集的游孢子萌发成的雄配子体丝状体细胞经过2-3个月后能够发育成孢子体，而且正常状态的极少。

无配生殖是单倍体发育成成体的一种，可用于单倍体育种。但目前已有的方法一般是在室内培育，如果培养时间过长，容易造成育种成本过高，且易被污染。尤其是在室内培育和自然生长条件差别较大，如果培育时间过长，一般藻体易生长不正常。

发明内容

本发明提供一种诱导低温弱光保存海带雄性种质发育的方法，即一种促进长期在低温弱光条件下保存的海带雄性种质丝状体细胞快速发育成幼孢子体的方法，从而弥补现有技术的不足。

本发明所提供的促进海带雄性种质发育的方法，包括如下的步骤：

1)将海带雄性种质丝状体放入到海水中12-36h，其中温度为4±1℃，每小时升高2℃，直至14±1℃；光照为1000lx，每小时升高1000lx，直至8000lx；

2)将海带雄性种质丝状体进行粉碎，然后将粉碎的丝状体进行过滤获得8-16个细胞大小的丝状体片段；

所述的粉碎，其实施例的一种具体记载是采用组织搅碎机粉碎，1500转/min，粉碎30s，

所述的过滤，优选是使用单层500目筛绢过滤3-5次；

3)将过滤获得丝状体片段进行培养，培养中的光源是荧光灯，光照强度8000±500lx，光照周期L﹕D＝12h﹕12h，培养温度为14±1℃；采用通气悬浮培养来获得膨大细胞；

获得膨大细胞的培养液组成如下：4ppm的NO₃-N、0.8ppm的PO₄-P、1ppm的FeC₆H₅O₇-Fe、：4ppm的GeO₂、2μg/L的VB₁₂；

在培养期间，优选每三天更换1/5的培养液；

4)诱导膨大细胞发育培养，培养中的光源是荧光灯，光照强度4000±200lx，光照周期是L﹕D＝12h﹕12h，培养温度为14±1℃；通气悬浮培养获得幼孢子体；

其中用于诱导膨大细胞发育培养的培养液组成为：4ppm的NO₃-N、0.8ppm的PO₄-P、1ppm的FeC₆H₅O₇-Fe、4ppm的GeO₂、VB₁₂：2ug/L。

每三天更换1/5的培养液。