[发明专利]一种检测人附睾分泌蛋白4的化学发光试剂盒

说明书

本发明公开了一种检测人附睾分泌蛋白4的化学发光试剂盒，试剂盒中包含人附睾分泌蛋白4、吖啶酯标记69‑G10‑B8‑G8检测抗体、生物素标记9‑C3‑D12‑B1捕获抗体。吖啶酯标记69‑G10‑B8‑G8检测抗体、生物素标记9‑C3‑D12‑B1捕获抗体分别由各自对应的杂交瘤细胞株69‑G10‑B8‑G8和9‑C3‑D12‑B1分泌获得。这两种杂交瘤细胞株是利用人工合成的HE4基因，经重组质粒、蛋白质表达、动物免疫和筛选，最终亚克隆获得。本发明公开的双抗体夹心复合物的检测灵敏度和精密度好，线性范围宽，对抗原的反应特异性好，不会产生交叉反应。

技术领域

本发明属于人附睾分泌蛋白的检测技术领域，特别是一种检测人附睾分泌蛋白4的化学发光试剂盒。

背景技术

人附睾分泌蛋白4(HE4)是一个新的高特异性卵巢癌标志物，HE4(又名WFDC2)，主要由WAP类型的4个二硫键核心(WFDC)组成，与细胞外蛋白酶抑制剂有很高的同源性。转录介质WFDC的蛋白质家族是白细胞中的蛋白酶抑制剂，HE4也假定在自然免疫中有作用。该基因编码的蛋白质基因位于染色体20q12～13.1，全长为12kb左右，由5个外显子和4个内含子组成，该基因存在多种剪切方式,编码分泌小分子蛋白。卵巢癌发病率位居三大妇科恶性肿瘤的第三位，由于其早期症状不明显而不容易被发现，随着患癌时间的增长，患者的5年生存率由70-90％降到20％，因此早期确诊对卵巢癌的治愈率至关重要。HE4首先在附睾远端上皮中发现，生理情况下在呼吸道、生殖系统和卵巢组织中有非常低水平的表达，但在卵巢癌组织和患者血清中均高度表达，88％的卵巢癌患者都会出现 HE4升高的现象。HE4是卵巢癌检测敏感性较高的肿瘤标志物，特别是早期无症状的I期卵巢癌。HE4是一种分泌蛋白，释放到体液中，卵巢中的表达仅限于肿瘤，特异性较高，而且在卵巢癌的早期晚期高度上调表达，疾病早期灵敏度较高。

HE4与CA125联合检测，可提高诊断准确性。HE4升高，CA125正常提示卵巢癌或其他类型的肿瘤，如子宫内膜癌。与CA125相比，HE4的敏感度更高、特异性更强，尤其在疾病初期无症状表现的阶段。疾病早期HE4诊断的敏感度是82.7％，CA125仅有45.9％； HE4的特异性高达99％，而CA125仅为20％。HE4与CA125联合应用，敏感性可增加到 92％，能将假阴性结果减少30％，可避免单一应用的阴性结果造成疾病复发监测的漏诊，大大增加卵巢癌诊断的准确性。

化学发光标记免疫分析又称化学发光免疫分析(CLIA)，是用化学发光剂直接标记抗原或抗体的免疫分析方法。常用于标记的化学发光物质为吖啶酯类化合物(AE)，其通过起动发光试剂(NaOH-2H₂O₂)作用而发光，强烈的直接发光在一秒钟内完成，为快速的闪烁发光。吖啶酯作为标记物用于免疫分析，其化学反应简单、快速、无须催化剂。

现有技术中，例如专利CN201510240537.X提供了一种基于金磁微粒的吖啶酯化学发光免疫学检测HE4的方法，采用先在金磁微粒表面偶联HE4包被抗体，然后封闭金磁微粒表面未与HE4包被抗体结合的空白位点，再标记抗体，与待测物结合、清洗，最后进行化学发光检测的方法，然而该专利技术所选用的HE4包被抗体和吖啶酯HE4标记抗体是现有的生物公司生产合成的抗体，未对HE4包被抗体和吖啶酯HE4标记抗体的种类进行研究，也未对两者如何配对使用进行研究，导致该方法的检测灵敏度并不能达到最佳。

发明内容

针对以上现有技术的不足，本发明提供了一种检测人附睾分泌蛋白4的化学发光试剂盒，具体通过以下技术实现。

一种检测人附睾分泌蛋白4的化学发光试剂盒，包括吖啶酯标记69-G10-B8-G8检测抗体、生物素标记9-C3-D12-B1捕获抗体；所述吖啶酯标记69-G10-B8-G8检测抗体是将单克隆抗体69-G10-B8-G8通过吖啶酯标记后制得，所述单克隆抗体69-G10-B8-G8是由杂交瘤细胞株69-G10-B8-G8分泌获得；