[发明专利]副干酪乳杆菌低盐培养基及培养方法

权利要求书

1.副干酪乳杆菌低盐培养基，其特征在于，包括无盐基础培养基和低盐优化培养基：

所述的无盐基础培养基的配方为：葡萄糖25.0～35.0g/L、酵母浸出物20.0～25.0g/L、酵母蛋白胨10.0～15.0g/L、柠檬酸2.0～6.0g/L、L-苹果酸2.0～6.0g/L、余量为纯化水；pH值6.70～6.90；

所述的低盐优化培养基的配方为：酵母浸出物30.0～35.0g/L、葡萄糖15.0～20.0g/L、酵母蛋白胨15.0～20.0g/L、乳糖10.0～15.0g/L、低聚异麦芽糖4.0～6.0g/L、柠檬酸4.0～6.0g/L、L-苹果酸4.0～6.0g/L、氯化钙0.4～0.6g/L、余量为纯化水；pH值6.70～6.90。

2.根据权利要求1所述的副干酪乳杆菌低盐培养基，其特征在于，

所述的无盐基础培养基的配方为：葡萄糖25.0g/L、酵母浸出物20.0g/L、酵母蛋白胨15.0g/L、柠檬酸6.0g/L、L-苹果酸6.0g/L、余量为纯化水；pH值6.80；

所述的低盐优化培养基的配方为：酵母浸出物30.0g/L、葡萄糖20.0g/L、酵母蛋白胨15.0g/L、乳糖10.0g/L、低聚异麦芽糖6.0g/L、柠檬酸5.0g/L、L-苹果酸5.0g/L、氯化钙0.5g/L、余量为纯化水；pH值至6.80。

3.根据权利要求1或2所述的副干酪乳杆菌低盐培养基，其特征在于，

所述的无盐基础培养基和低盐优化培养基制备方法如下：按照配方比例称量、加热溶解，用1mol/L食品级NaOH溶液调培养基pH值至6.70～6.90，115℃下灭菌30min。

4.权利要求1-3所述的任一种副干酪乳杆菌低盐培养基的培养方法，其特征在于，包括如下步骤：

1)冻存菌种复苏：取存于低温冰箱内的副干酪乳杆菌菌种冻存管，立即放入37℃水浴锅内进行菌种复苏，15～30s，至冻存管内的固体全部融化；

2)菌种活化：将复苏好的菌种直接接种至装有10mL无盐基础培养基的三角瓶中，三角瓶密封，35℃培养箱恒温静置培养，培养16-20h；

3)菌种扩培：将菌种活化结束的菌悬液接种至装有100mL无盐基础培养基的三角瓶中，三角瓶密封，35℃培养箱恒温静置培养，培养16-20h；

4)一级发酵：将菌种扩培结束的菌悬液接种至装有10L低盐优化培养基的20L发酵罐中，开启搅拌桨，转速为100rpm，通气量为0，35℃恒温培养，发酵开始时，设定自动流加食品级NaOH以调控菌液pH值，发酵进行9.5h开始，每0.5h监控菌液OD值，当培养时间≥11h或OD值＞9.00，每15min监控菌液OD值；当接连两次OD值增加值＜0.30，发酵结束；

5)二级发酵：将一级发酵结束的菌悬液接种至装有140L低盐优化培养基的200L发酵罐中，开启搅拌桨，转速为60rpm，通气量为0，35℃恒温培养，在发酵开始时，通过流加食品级NaOH溶液以调控菌液pH值，发酵进行7h开始，每0.5h监控菌液OD值，当培养时间≥8h或OD值＞9.00，每15min监控菌液OD值；当接连两次OD值增加值＜0.20，发酵结束，对发酵罐进行降温调控；

6)发酵液离心：离心设备采用管式离心机，离心前对转鼓进行蒸汽灭菌30min，转速为12000～14000rpm，结束进料后，空转5min；

7)离心结束后，收集菌泥。

5.根据权利要求4所述的培养方法，其特征在于，步骤3)中，所述的接种量为3～7％。

6.根据权利要求4所述的培养方法，其特征在于，步骤4)中，所述的接种量为3～7％。

7.根据权利要求4所述的培养方法，其特征在于，步骤5)中，所述的接种量为3～7％。

8.根据权利要求4所述的培养方法，其特征在于，步骤4)、步骤5)中，在恒温培养发酵开始时，通过流加食品级NaOH溶液以调控菌液pH值为5.4～5.6。