[发明专利]单纯疱疹病毒抗体IgG化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法

权利要求书

1.单纯疱疹病毒抗体IgG化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，包括R1试剂、R2试剂和项目稀释液；

R1试剂包括磁珠包被抗原，抗原为HSV-1抗原或HSV-2抗原；

R2试剂包括化学发光标记物标记的抗人IgG抗体；

项目稀释液为pH6.0～8.0的含有盐、表面活性剂、防腐剂及蛋白的缓冲液。

2.根据权利要求1所述的单纯疱疹病毒抗体IgG化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，所述R1试剂中，磁珠包被抗原的浓度为0.05wt％～0.2wt％。

3.根据权利要求1所述的单纯疱疹病毒抗体IgG化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，所述磁珠包被抗原采用的磁珠的粒径为0.5～3.0μm。

4.根据权利要求1所述的单纯疱疹病毒抗体IgG化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，所述磁珠与包被抗原的质量比为10mg:(50～500)μg。

5.根据权利要求1所述的单纯疱疹病毒抗体IgG化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，所述R2试剂中，化学发光标记物标记的抗人IgG抗体的浓度为0.1～1.0μg/ml。

6.根据权利要求1所述的单纯疱疹病毒抗体IgG化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，所述化学发光标记物标记的抗人IgG抗体，抗人IgG抗体与化学发光标记物的标记摩尔比为1:(3～10)；化学发光标记物为吖啶酯或三联吡啶钌；抗人IgG为鼠抗人IgG或羊抗人IgG。

7.根据权利要求1所述的单纯疱疹病毒抗体IgG化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，所述项目稀释液中，盐为50～200mM的磷酸盐、柠檬酸盐或Bistris丙烷；表面活性剂为0.02％～0.05％的吐温20或0.05％～0.1％氯化胆碱；防腐剂为0.01～0.03％的迭氮钠和0.01～0.03％的PC300，蛋白为0.1％～3％牛血清蛋白和0.01％～0.2％牛γ球蛋白。

8.根据权利要求1所述的单纯疱疹病毒抗体IgG化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，该试剂盒还包括校准品、化学发光激发液和清洗液中的一种或多种；

所述校准品包括阳性校准品和阴性校准品，阳性校准品为单纯疱疹病毒IgG阳性血清灭活、过滤后，经缓冲液稀释而成；阴性校准品为单纯疱疹病毒IgG阴性血清灭活、过滤后经缓冲液稀释而成；

所述化学发光激发液包括A液和B液，A液为过氧化氢溶液和硝酸溶液，B液为氢氧化钠溶液；

所述清洗液为PB缓冲液。

9.权利要求1～8任何一项所述的单纯疱疹病毒IgG的化学发光免疫检测试剂盒的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤一、制备R1试剂

将磁珠溶液混匀，磁分离移除上清液，清洗液清洗多次后重悬，加入包被抗原，混匀，并在持续旋转混匀下，37℃孵育2～4h，磁分离去上清液，清洗液清洗多次后，用赖氨酸封闭液进行封闭，磁分离去上清，留取磁珠包被抗原，用缓冲液重悬至所需浓度，得到R1试剂；

步骤二、制备R2试剂

先将抗人IgG单克隆抗体放入离心管中，保证抗人IgG单克隆抗体位于离心管底部位置后加入碳酸缓冲液，充分混匀，混匀后加入化学发光标记物的N,N-二甲基甲酰胺溶液，用离心机室温条件下离心20～40s；

然后将离心管用封口膜密封后放入避光暗盒中，将暗盒放入气浴恒温振荡器中混匀，加入赖氨酸封闭液，放入气浴恒温振荡器中混匀，封闭0.5～2h；

再将封闭好的抗人IgG单克隆抗体上葡聚糖凝胶G250柱纯化，用磷酸缓冲液洗脱，分别收集；

最后将收集好的抗人IgG单克隆抗体溶液用缓冲液稀释，即为R2试剂；

步骤三、根据项目稀释液的配方配制项目稀释液；

步骤四、将R1试剂、R2试剂和项目稀释液分装，完成单纯疱疹病毒IgG的化学发光免疫检测试剂盒的制备。

10.根据权利要求9所述的单纯疱疹病毒IgG的化学发光免疫检测试剂盒的制备方法，其特征在于，所述步骤一中，重悬使用的缓冲液为25M的pH7.2的Tris缓冲液；所述步骤二中，稀释用的缓冲液与项目稀释液相同。