[发明专利]一种深绿木霉HB20111在防治小麦茎基腐病和纹枯病上的应用

权利要求书

1.一种深绿木霉HB20111的应用，其特征在于，所述应用为防治小麦茎基腐病和纹枯病，所述深绿木霉HB20111的分类命名为深绿木霉Trichoderma atroviride，于2018年12月5日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCC No. 16963。

2.如权利要求1所述的一种深绿木霉HB20111的应用，其特征在于，所述深绿木霉HB20111通过对小麦拌种防治土传真菌病害。

3.如权利要求2所述的一种深绿木霉HB20111的应用，其特征在于，所述应用为采用含有HB20111的生物拌种剂对小麦进行拌种。

4.如权利要求3所述的一种深绿木霉HB20111的应用，其特征在于，所述生物拌种剂的制备方法包括以下步骤：

使用载体对深绿木霉HB20111孢子悬液进行吸附，形成固体菌剂，加入质量分数1%-8%羧甲基纤维素钠和质量分数1%-5%海藻酸钠后用搅拌机混匀，调整菌数不低于2.0×10⁸cfu/g，在流化床中50℃干燥至水份含量10%以下。

5.如权利要求4所述的一种深绿木霉HB20111的应用，其特征在于，所述载体包括硅藻土、麦饭石或草炭土。

6.如权利要求4所述的一种深绿木霉HB20111的应用，其特征在于，所述深绿木霉HB20111孢子悬液的制备方法包括以下步骤：

①固体一级种子制备：采用PDA培养基，将深绿木霉HB20111试管菌种接种在试管培养基中，28℃培养，4℃冰箱保存，要求菌丝与分生孢子丰满，无杂菌；然后接种茄形瓶，采用PDA培养基，28℃培养，菌龄5-10天，要求菌落表面无液态水，菌丝与分生孢子丰满，无杂菌污染；

②液体种子制备：使用115℃灭菌30分钟的1%的葡萄糖水冲洗茄瓶表面，将新鲜孢子洗下后稀释至1×10⁶-1×10⁷孢子/mL作为固体接种的液体种子；

③接种固体培养基：固体培养基的组成包括麦粒和稻壳，所述麦粒和稻壳的质量比为49：5，固体培养基的含水量为70%，FeSO₄为100ppm，121℃灭菌40分钟后以循环水冷却，接种量为2%-5%，在混合接种器内将液体种子和固体培养基混合均匀，转移到固体培养室内培养96-120h；

④制备孢子悬液：将发酵好的固体发酵培养基按培养基与水质量比1：1的比例浸润至水中，搅拌使固料中的分生孢子分散至水中，过滤去除固体发酵原料，获得孢子悬液，调整浓度至5.0×10⁹孢子/mL。

7.如权利要求6所述的一种深绿木霉HB20111的应用，其特征在于，所述步骤③的培养条件为：

1）菌丝生长阶段：固体培养基厚度控制在5cm以下，料温控制在30±2℃，室温控制在25-30℃，空气的相对含水量控制在95-100%，固体发酵室内配备新风系统，采用室内CO₂浓度反馈调节，培养室的面积根据产能确定；

2)孢子产生阶段：料温控制在30±2℃，培养基表面不能有液态水，空气的相对湿度不低于90%，定时取样计算分生孢子数，当每克固体发酵物中分生孢子数达到5×10⁹时即可收获。