[发明专利]一种检测血清抗Annexin A2

说明书

本发明提供一种检测血清抗Annexin A₂‑IgG抗体的试剂盒，本发明的检测试剂盒采用一种原发性肾病综合征相关生物标志物的抗Annexin A₂‑IgG抗体所对应的靶抗原Annexin A₂，以人抗标签肽的IgG作为定量检测的标准品，并利用生物素标记检测抗体和酶标标记链霉亲和素放大系统，从而提高了血清抗Annexin A₂‑IgG抗体检测的准确性和敏感性，为以抗Annexin A₂‑IgG抗体来进行原发性肾病综合症诊断和治疗提供了一种较好的检测方法。

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及一种检测血清抗Annexin A₂-IgG抗体的试剂盒。是一种快速简便高灵敏地定性或定量分析人血清中抗Annexin A₂-IgG水平的检测试剂盒。

技术背景

近年来儿童肾脏疾病种类越来越多，其中以原发性肾病综合症发病率最高，严重危害了儿童身心健康。原发性肾病综合症由多种原因引起肾脏功能损伤同时出现“三高一低”的症状，即大量蛋白尿、高度浮肿、高血脂症和低蛋白血症一组综合征。原发性肾病综合征的病因及发病机制目前尚不明确，主要有以下因素：一、滤过屏障损伤，免疫球蛋白和(或) 补体成分肾内沉积，局部免疾病理损伤滤过膜正屏障尿中丢失大-中分子量的多种蛋白，形成低选择性蛋白尿。二、静电屏障破坏，使大量带阴离子电荷的中分子血浆蛋白滤出，形成高选择性蛋白尿。肾小球滤过屏障包括电荷屏障和机械屏障两大部分，电荷屏障位于毛细血管内皮细胞内侧，是由一组带有负电荷的生物大分子组成，可防止带负电荷的分子如白蛋白被滤过；机械屏障由内向外依次为毛细血管内皮细胞、肾小球基底膜、上皮细胞足突间的裂孔膜，这三层结构及其上的裂孔是机械屏障的结构基础，以防止中大分子被滤过。其中肾小球足细胞滤过孔径为25-40nm，是滤过膜中最后一道屏障，又是滤过膜中最小的滤过孔。足细胞是合成富含带阴电荷组成屏障的硫酸类肝素的主要细胞来源细胞，并将硫酸类肝素分布于基底膜(GBM)及其两侧。足细胞本身也覆盖着带阴电荷的唾液酸糖蛋白，共同维持着滤过膜的电荷屏障功能。但足细胞特殊的解剖位置，使得其体内研究较为困难；又由于正常成年机体的肾脏足细胞是一种终末分化细胞，体外培养的原代细胞不能增殖。所以过去的足细胞体外研究工作开展得很少。直到90年代中期用转基因的方法建立了条件培养的永生代小鼠足细胞系，才使得对足细胞的结构共讷讷的认识和其在肾小球疾病中的作用及机理的研究取得了突破性的进展。

发明内容

本申请的目的是提供一种检测血清抗Annexin A₂-IgG抗体的试剂盒，主要包括抗原蛋白Annexin A₂、固相载体、阳性质控品、标准品、酶标记或化学发光剂标记或生物素标记的抗人IgG、底物显色剂、抗原稀释液、样品稀释缓冲液、抗体稀释液、洗涤液、终止液，信号检测方法包括光显色法、化学发光法。

所述抗原蛋白Annexin A₂包含cDNA序列GenBank(CM-000677.2)SEQ ID:1如下：(chromosome15,101bp from base 60347151-60347252: -TGATTTTATTTTATTTTATTTCATTTAAATTTAACTTAAATAGCGACACTTGGATAGGGGCA ACCATACTGTACAGCTCAGTCCCAGAGCTTTCTTCCTACA-)。

所述抗原蛋白Annexin A₂固定于固相载体上，优选的固相载体包括：硝酸纤维素膜、酶标微孔板。

所述标准品和阳性质控品，标准品和阳性质控品为重组人抗标签肽免疫球蛋白G或其片段、或从病人血清中提取抗Annexin A₂抗体作为阳性质控品和标准品。