[发明专利]海洋曲霉菌产生的抗真菌化合物及其制备方法

说明书

本发明属于医药生物领域，涉及采用共培养(又称混合培养)技术，从海洋来源的花斑曲霉菌的发酵产物中获得5个新结构抗真菌化合物(式I‑V所示)及其制备方法；本发明还涉及所述化合物抗真菌感染的应用。

技术领域：

本发明属于医药生物领域，涉及采用共培养(又称混合培养)技术，从海洋来源的花斑曲霉菌的发酵产物中获得5个新结构抗真菌化合物(式I-V所示)及其制备方法；本发明还涉及所述化合物抗真菌感染的应用。

背景技术：

海洋微生物是药物先导化合物发现的重要来源。真菌基因组通常携带有20～50种次级代谢生物合成基因。大多数次级代谢相关基因，在常规实验条件下，表达量极低或完全处于沉默状态，称为“沉默基因”。在自然环境中，不同种类的微生物(细菌、放线菌、真菌)共存于同一复杂体系。微生物之间通过产生代谢产物进行资源竞争、化学防御或信息交流。在共培养(混合培养)条件下，由于受到其它微生物的竞争压力，可能使处于沉默状态的基因得到激活，从而产生新的次级代谢产物。研究表明，共培养有助于增加微生物次级代谢产物的化学多样性，诱导产生良好的生物活性，其中最常见的是由化学防御机制产生的抗菌和细胞毒活性。本发明利用共培养技术，从来源于海洋花斑曲霉菌IMB17-055(Aspergillusversicolor)与其它真菌的共培养发酵液中，发现5个新结构的化合物，命名为共生霉素A-E(英文名称：cocultimycin A-E，如式I-Ⅴ所示)。涉及式I-Ⅴ所示化合物的化学结构、制备方法及抗真菌应用，迄今为止，尚未见有关报道。

发明内容：

本发明目的之一是，提供一株共生霉素A-E(cocultimycin A-E)的产生菌。

该菌株为一种海洋真菌，优选为花斑曲霉菌IMB17-055，系分离自三亚红树林采集的海泥样品，为该菌株于2019年7月12日送交北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏编号：CGMCCNo.18107，建议的分类命名：花斑曲霉Aspergillus versicolor，参据的生物材料：IMB17-055。

本发明目的之二是，提供五种新结构的化合物共生霉素I-V(如式I-V所示)。

本发明从海洋真菌花斑曲霉菌IMB17-055(Aspergillus versicolor)与其它真菌的共培养发酵产物中发现5个新结构化合物，其结构如式I-Ⅴ所示。

本发明目的之三是，提供式I-V所示化合物共生霉素A-E的制备方法。

本发明所述的式I-V所示化合物共生霉素A-E的制备方法，包括以下步骤：

(1)将活化的保藏编号为CGMCC No.18107的花斑曲霉菌IMB17-055和其它一种丝状真菌分别接种于马铃薯葡萄糖肉汤培养基(PDB)的发酵培养基中，制作种子液。随后，将两种菌株的种子液按等比例混合，然后转接于PDB发酵培养基中，进行共培养；

(2)将共培养发酵产物过滤得到上清液和菌丝体，上清液用溶剂进行萃取，得到上清液提取物，菌丝体用溶剂超声提取，得到菌丝体提取物；

(3)将上述两部分提取物合并，通过C18反相柱色谱分离，依次用10％、30％、50％、70％、100％甲醇溶液梯度洗脱。将100％洗脱组分经HPLC制备得到式I-Ⅴ所示的化合物。

优选的，本发明所述的化合物共生霉素A-E的制备方法，包括以下步骤：

(1)将活化的保藏编号为CGMCC No.18107的花斑曲霉菌IMB17-055与另外一种丝状真菌接种于配方为马铃薯葡萄糖肉汤培养基(PDB)的发酵培养基中，28℃，200r/min，摇瓶培养3天制作种子液。将两株菌的种子液按1:1的比例混合，随后按10％的接种量接种到装有100mL PDB发酵培养基的500mL锥形瓶中，28℃，200r/min震荡培养10天；