[发明专利]高CG片段与低CG启动子联用构建高效表达载体的方法

权利要求书

1.一种高CG片段与低CG启动子联用构建高效表达载体的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

（1）选择含增强子且在转录起始位点上游CG含量＜50%的启动子为靶启动子，所述靶启动子为人源OCT4基因启动子，其基因序列如序列1所示；

（2）用所述靶启动子替换商业载体pEGFP-C1上的外源基因表达框中CMV启动子，构建中间载体；

（3）在所述中间载体的外源基因表达框之前Ase I酶切位点插入1-1.5kb的CG含量＞70%的CG片段U1，其基因序列如序列2所示，构建表达载体；所述表达载体经验证能使EGFP基因表达量持续稳定高效表达。

2.根据权利要求1所述高CG片段与低CG启动子联用构建高效表达载体的方法，其特征在于，所述构建中间载体步骤中，用带AgeI和AseI双酶切位点引物扩增所述靶启动子序列，所述引物为：

OCT4＃正向引物：TAGTTATTAAT(Ase I)AGACCCAGGAGACTCAAAG

OCT4＃反向引物：TGCGGACCGGT(Age I)ACGCGTAGTGATTACCCAAGA。