[发明专利]一种用于肿瘤细胞分离培养的纳米颗粒及其制备方法

说明书

一种用于肿瘤细胞分离培养的纳米颗粒，具有核壳结构，所述纳米颗粒的核是改性纳米分子筛；所述改性纳米分子筛的红外酸度1.0‑10.0mg·mol/g，优选是3.0‑5.0mg；所述颗粒的壳是叶酸接枝聚丙烯酰胺。该纳米颗粒具有良好的稳定性和水溶性，可以重复利用。纳米颗粒表面具有多种活性基团，不仅可以用于肿瘤细胞的分离，还可以负载多种标记物或药物，进一步用于细胞成像、肿瘤靶向治疗以及治疗效果实时监测等多个领域，具有广泛的应用前景。

技术领域

本发明属于肿瘤细胞分离领域，具体涉及到一种用于肿瘤细胞分离的纳米颗粒及其制备方法与应用。

背景技术

据世界卫生组织统计，21世纪恶性肿瘤将成为危害人类生命安全的“第一杀手”。恶性肿瘤具有生长迅速，局部浸润和远处转移等特点，这对临床上的根治带来极大难度。中国每年有160万人次的新增癌症病例，每年约有130万人死于癌症。在中国城市居民的死因中，癌症是导致死亡的第一原因，对于中国农村居民来说，癌症是第二大死亡原因。对于大多数老年人来说，癌症属于多发病和常见病。然而，在科研人员对癌症病人的统计与分析中，发现约80％～90％的早期癌症患者可以被治愈。但对于晚期癌症患者来说，经五年以上治疗后的幸存者却寥寥无几。很多早期癌症患者在接受治疗后，不但提高了生存率，而且提高了患者的生活质量，从而有效降低了癌症患者的死亡率。所以对于癌症患者的早期发现，早期诊断，早期治疗是治愈的关键所在。

肿瘤细胞的体外培养对研究肿瘤复杂的病理生理机制具有重要的意义。近年来，三维细胞培养广泛应用于生物医学研究的各个领域，尤其是在肿瘤研究中发展迅速。肿瘤细胞的三维培养首先需要将肿瘤细胞从病理组织中分离出来，如果分离出的肿瘤细胞纯度不够，则可能影响肿瘤特异性激活CTL的能力。在原代肿瘤细胞分离与培养过程中，细菌污染也是一个影响培养成功率的决定性因素，肿瘤细胞多来自于手术中切除的组织样本，在转移的过程中也可能存在污染。因此肿瘤细胞的纯化和分离是肿瘤细胞培养的关键环节。

肿瘤标志物是指在肿瘤的发生和增殖期间标记肿瘤的存在与生长的一类物质，是区分正常细胞和肿瘤细胞的标准。一般来说肿瘤标志物存在于肿瘤患者的组织、体液和排泄物中。主要包括蛋白质、激素、多巴胺、酶等种类。它们的存在和量的变化可以有效反映肿瘤的性质，为我们了解当前肿瘤组织的特征期，当前肿瘤细胞的大致状态，对癌症的诊断、分类和治疗提供指导意义。这些物质的含量在健康个体中不存在或含量极低，但在癌症患者中明显高于健康个体。通过对血清或其他组织液中肿瘤标志物含量的标定成为癌症早期诊断和肿瘤细胞分离的有效途径。

在众多肿瘤细胞受体中，叶酸受体(Folate receptor，FR)在大多数正常组织中表达较少或者不表达，而在卵巢癌、乳腺癌、结肠癌等肿瘤细胞中过度表达。叶酸又称维生素B9，是机体生长和繁殖的必需物质，无毒、稳定且无免疫原性，尤其可特异性地与细胞表面的叶酸受体作用，通过受体介导的内吞作用被细胞摄入利用这种特性，可设计以叶酸作为靶向配体，以肿瘤细胞叶酸受体为靶点的主动靶向制剂。

CN104614359A公开了一种新型的具有强拉曼信号的纳米杂化拉曼球，以修饰生物条码DNA1和DNA2的拉曼球为对象，设计了一种拉曼探针，该探针实现了对miRNA的高灵敏度、高选择性的检测。利用磁珠上修饰的捕获DNA捕获检测对象miRNA，miRNA与捕获链DNA3杂交，然后DNA3发生滚环复制得到一条长的DNA链，该长DNA链能分段与多条DNA2特异性杂交，亦即捕获多个纳米杂化拉曼球，产生超强拉曼信号，可准确识别肿瘤细胞和正常细胞，稳定性和可信性高。

CN102879364A公开了一种量子点水相合成方法，包括水溶性量子点的合成，带有巯基功能团的生物相容性修饰剂mPEG和肿瘤细胞靶向修饰剂cRGD的合成以及量子点与带有巯基的两种修饰剂的直接反应。该方法制备的修饰后量子点粒径为5nm左右，荧光明亮，抗光致漂白性质强，具有很好的生物相容性。通过进一步调节量子点表面mPEG和cRGD的摩尔比可有效调控量子点对人乳腺癌MDA-MB-231细胞的转染效率，可应用于肿瘤靶向的细胞荧光成像检测。

发明内容