[发明专利]生物素-亲和素或链霉亲和素的无微球均相化学发光体系

说明书

本发明公开了生物素‑亲和素或链霉亲和素的无微球均相化学发光体系，以及将其用于定量测量抗原或抗体的方法，涉及化学发光体系技术领域，所述的无微球均相化学发光体系包括：生物素标记的抗体或抗原、9,10‑二氢吖啶标定的抗体或抗原、HRP标记的亲和素或链霉亲和素。生物素‑亲和素或生物素‑链霉亲和素的无微球均相化学发光(No Microspheres Honogeneous Luminescent(Biotin‑Avidin/streptavidin))体系不使用微球，是均相体系；引入生物素‑亲和素/链霉亲和素系统，可以大大提高化学发光效率，提高检测灵敏度，实例S100B蛋白最低检测浓度可达到0.015ng/ml；该体系检测过程不需清洗，方便简单，可用于自动免疫均相化学发光系统，POCT及微流控芯片等快速定量分析。

技术领域

本发明涉及化学发光体系技术领域，具体涉及生物素-亲和素或链霉亲和素的无微球均相化学发光体系，以及将其用于定量测量抗原或抗体的方法。

背景技术

LOCI(Luminescent oxygen channeling immunoassay)诊断技术在90年代初由美国科学家Ullman教授发现，并由美国德灵公司开发。该技术是一种基于两个纳米微球利用单线氧能量的短距离扩散，激发已形成的相邻位点的化学发光反应来测定生物分子之间的相互作用，是一种非放射性的检测分析方法，由捕获微球上生物分子的近距离结合，从一个微球到另一个微球发生了能量转移，通过化学反应并最终产生发光信号。

LOCI体系需用两种不同的微球，微球内需分别灌装光敏剂酞菁染料和二甲基噻吩衍生物、稀土螯合物，不同批间微球的均一性和微球内定量灌装需要苛刻的生产工艺和设备，同时使用微球的体系也并不是真正的均相，非均相会影响检测结果的重复性。

生物素－亲和素系统(Biotin-Avidin—System，BAS)是70年代末发展起来的一种新型生物反应放大系统。生物素与亲和素之间高亲合力的牢固结合以及多级放大效应，使BAS免疫标记和有关示踪分析更加灵敏。BAS目前已广泛用于抗原、抗体的定性、定量检测及定位观察研究。

生物素(biotin，B)广泛分布于动、植物组织中，常从含量较高的卵黄和肝组织中提取，分子量244.31Da.生物素分子有两个环状结构，其中Ⅰ环为咪唑酮环，是与亲和素结合的主要部位；II环为噻吩环，C2上有一戊酸侧链，其末端羧基是结合抗体和其他生物大分子的惟一结构，经化学修饰后，生物素可成为带有多种活性基团的衍生物——活化生物素。

亲和素(avidin，AV)亦称抗生物素蛋白、卵白素，是从卵白蛋白中提取的一种由4个相同亚基组成的碱性糖蛋白，分子量为68kD。4个相同的亚基使每个亲和素能最多可结合4个分子的生物素。生物素与亲和素之间具有极强的亲和力，比抗原与抗体间的亲和力高很多。并且，二者的结合稳定性好、专一性强。链霉亲和素(streptavidin，SA)分子由4条相同的肽链组成，其氨基酸组成中，甘氨酸和丙氨酸的含量较大，而且结合生物素的活性基团也是肽链中的色氨酸残基；链霉亲和素是一种稍偏酸性(pH6.0)的蛋白质，并且不带任何糖基。在蛋白水解酶作用下，链霉亲和素可在N端10-12和C端19-21间断裂，形成的核心链霉亲和素仍然保持完整的结合生物素的能力。链霉亲和素的活性单位以结合1μg生物素所需的量来表示，1mg链霉亲和素的最高活性可达18U。

目前，还没有一种基于生物素-亲和素或生物素-链霉亲和素的无微球均相化学发光体系，可用于自动免疫均相化学发光系统，POCT及微流控芯片等快速定量分析。

发明内容

针对现有技术中的缺陷，本发明提供一种基于生物素－亲和素或生物素-链霉亲和素的无微球均相化学发光体系，其特征在于：包括：生物素标记的抗体或抗原、9,10-二氢吖啶标定的抗体或抗原、HRP标记的亲和素或链霉亲和素。