[发明专利]生物素-亲和素或链霉亲和素的无微球均相化学发光体系

权利要求书

1.一种基于生物素-亲和素或生物素-链霉亲和素的无微球均相化学发光体系，其特征在于：包括：生物素标记的抗体或抗原、9,10-二氢吖啶标定的抗体或抗原、HRP标记的亲和素或链霉亲和素；所述的HRP标记的亲和素或链霉亲和素的制备步骤如下：在1mg HRP中加入60mmol/L NaIO40.1ml于4℃作用30分钟，再加入0.1ml浓度0.16mol/L的乙二醇，30分钟后，加入1mg A或SA,4℃静置24小时；透析过夜，加等体积的饱和硫酸铵溶液，4000r/min离心15分钟，将沉淀物溶解于PBS中，280nm下测吸光度并进行200-280nm波长扫描；用Sephadex G-75装柱，HRP-SA或HRP-A上样100ul，用0.025mol/LKCL-0.2mol/L乙酸缓冲液，以0.5ml/2min的速度淋洗，分部收集；用DU800紫外分光光度计测量收集各管样品的OD280值，绘制洗脱曲线，收集单白峰，透析液用PEG-2000进行浓缩；取10ul的HRP-SA或HRP-A和100ul去离子双蒸馏水，用紫外分光光度计在200-280nm波长扫描，至HRP-SA在280nm处有吸收峰；所述的PBS的PH为7.4；所述的生物素标记的抗体或抗原的制备步骤如下：将待生物素标记的抗原或抗体用缓冲液稀释到1-2.5ml，制得抗原或抗体溶液，所述缓冲液为0.1mol/L的碳酸氢钠缓冲液或0.5mol/L的硼酸缓冲液；将1mg的NHSB溶解于1ml的DMS0中，制得NHSB溶液；取1ml抗原或抗体溶液在其中加入120u1NHSB溶液，室温下搅拌，保温2-4小时，再向其中加入9.6μl浓度为1mol/L的NH4CL，搅拌10分钟；在4℃,对PBS进行透析,除去游离的生物素；将样品上1ml的分子筛柱,以PBS缓慢洗脱,收集1ml/管,抗原或抗体在1-3m1之间洗下；洗脱液中加入其体积50％的重蒸甘油,置于20℃保存；所述的碳酸氢钠缓冲液的pH为8.0；所述的硼酸缓冲液的pH为8.6。

2.利用权利要求1所述的无微球均相化学发光体系定量测量抗原或抗体的方法，其特征在于：所述的方法步骤如下：S1、试剂配制：分别配制校准品、辅助剂和触发剂，制备生物素标记的抗体或抗原、9,10-二氢吖啶标定的抗体或抗原、HRP标记的亲和素或链霉亲和素；S2、加样：在校准品或样本中加入生物素标记的抗体或抗原、9,10-二氢吖啶标定的抗体或抗原、HRP标记的亲和素或链霉亲和素，震荡混匀，制得待测混合物A；S3、检测：在待测混合物A中加入辅助剂，震荡混匀，静置，加入触发剂，震荡混匀，制得待测混合物B，进行检测，读取发光值；S4、计算：对校准品的浓度和发光值进行logistic四参数拟合，通过样本RLU计算样本浓度。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：步骤S2中所述的校准品、样本、酶标记物、生物素标记物和发光标记物的加入体积为25uL。

4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：步骤S3中所述的辅助剂和触发剂的加入体积分别为5uL和75uL。

5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：步骤S3中所述的静置时间为1-2分钟。