[发明专利]用于C-kit基因突变检测的引物组合及其应用

权利要求书

1.用于C-kit基因突变检测的引物组合，其特征在于，包括C-kit第9号外显子(C-kit-E9)、第11号外显子(C-kit-E11)、第13号外显子(C-kit-E13)、第17号外显子(C-kit-E17)、第18号外显子(C-kit-E18)的野生型引物和突变型引物；

其中，第9号外显子的野生型引物的正向引物序列如SEQ ID NO.1所示，

第9号外显子的野生型引物的反向引物序列如SEQ ID NO.2所示，

第9号外显子的突变型引物的正向引物序列如SEQ ID NO.3所示，

第9号外显子的突变型引物的反向引物序列如SEQ ID NO.4所示，

第11号外显子的野生型引物的正向引物序列如SEQ ID NO.5所示，

第11号外显子的野生型引物的反向引物序列如SEQ ID NO.6所示，

第11号外显子的突变型引物的正向引物序列如SEQ ID NO.7所示，

第11号外显子的突变型引物的反向引物序列如SEQ ID NO.8所示，

第13号外显子的野生型引物的正向引物序列如SEQ ID NO.9所示，

第13号外显子的野生型引物的反向引物序列如SEQ ID NO.10所示，

第13号外显子的突变型引物的正向引物序列如SEQ ID NO.11所示，

第13号外显子的突变型引物的反向引物序列如SEQ ID NO.12所示，

第17号外显子的野生型引物的正向引物序列如SEQ ID NO.13所示，

第17号外显子的野生型引物的反向引物序列如SEQ ID NO.14所示，

第17号外显子的突变型引物的正向引物序列如SEQ ID NO.15所示，

第17号外显子的突变型引物的反向引物序列如SEQ ID NO.16所示，

第18号外显子的野生型引物的正向引物序列如SEQ ID NO.17所示，

第18号外显子的野生型引物的反向引物序列如SEQ ID NO.18所示，

第18号外显子的突变型引物的正向引物序列如SEQ ID NO.19所示，

第18号外显子的突变型引物的反向引物序列如SEQ ID NO.20所示。

2.权利要求1所述用于C-kit基因突变检测的引物组合在制备检测C-kit基因突变的检测试剂或检测C-kit基因突变的检测试剂盒中的应用。

3.基于权利要求1所述用于C-kit基因突变检测的引物组合进行非诊断目的的C-kit基因突变的快速检测方法，其特征在于，包括如下步骤：

针对C-kit第9号外显子(C-kit-E9)、第11号外显子(C-kit-E11)、第13号外显子(C-kit-E13)、第17号外显子(C-kit-E17)、第18号外显子(C-kit-E18)突变位点两端分别设计一对野生型引物，并在突变位点上设计一对突变引物；

分别扩增出野生型模板和突变型片段，再用野生型引物以两个突变片段为模板进行PCR扩增，得到突变型模板，扩增对应的突变型模板；

不同比例混合野生型模板和突变型模板，用HRM方法进行区分。

4.根据权利要求3所述方法，其特征在于，PCR产物的高分辨率熔解曲线基于HRM的基因分型-Tm的不同，PCR产物的Tm取决于GC含量。

5.根据权利要求3所述方法，其特征在于，纯合子样品的扩增产物进行熔解曲线，得到相似峰形的熔解曲线，杂合子样品的扩增产物进行熔解曲线，得到不同峰形的熔解曲线；

其中，纯合子包括野生型纯合子或突变纯合子。

6.根据权利要求3所述方法，其特征在于，所述不同比例混合野生型模板和突变型模板是指：使突变型模板的含量为1/10、1/100、1/1000和0，最后用HRM方法进行区分。