[发明专利]检测副溶血性弧菌的试剂盒及检测方法

说明书

本发明提供了一种检测副溶血性弧菌的试剂盒及检测方法。本发明人筛选获得一株独特的抗副溶血性弧菌的单克隆抗体，对于不同型别的副溶血性弧菌具有广谱结合/识别能力，而对于副溶血性弧菌以外的其它菌株则不发生结合/识别，特异性和敏感性俱佳。本发明还提供了含有该单克隆抗体的试剂盒以及利用该单克隆抗体进行副溶血性弧菌检测的方法。

技术领域

本发明属于微生物检测领域，更具体地，本发明涉及检测副溶血性弧菌的试剂盒及检测方法。

背景技术

弧菌(Vibrio)是菌体短小，弯曲成弧形，尾部带鞭毛的革兰氏阴性菌。弧菌属(Vibrio)为弧菌科的1属。弧菌属细菌种类多，分布广泛，尤其是水中最为常见。

副溶血性弧菌是一种嗜盐性海洋弧菌，易引起食物中毒，其污染主要来自海产品，如墨鱼、海鱼、海虾、海蟹、海蜇，以及含盐分较高的腌制食品，如咸菜、腌肉等。临床症状以急性起病、腹痛、呕吐、腹泻及水样便为主要症状。在中国，副溶血弧菌是细菌性食物中毒事件最主要病原菌。因此，针对食品及环境中污染的副溶血性弧菌，建立快速有效的检测技术，实现副溶血弧菌的有效监控，对降低微生物性的食源性疾病的发生，有极其重大的意义。

目前我国食品中副溶血弧菌的检测主要依据“金标准”的是国标GB/T 4789-2013《食品安全国家标准食品微生物学检验副溶血性弧菌检验》或PCR检测方法，国标方法检测需要专业的微生物技术人员，而PCR方法对仪器设备和检测环境要求很高。

基于免疫学的ELISA方法操作简便，检测时间短，可实现样品的高通量(最高可达96个样品)检测，在食源性致病菌检测监测与控制体系中发挥着至关重要的作用。但是，ELISA检测方法中使用的结果的准确性取决于抗体的质量。弧菌类细菌有大量的同源蛋白，而副溶血性弧菌这一种属又有多个血清型，要筛选出能同时检测多种血清型的副溶血性弧菌而不与其他细菌发生交叉反应的抗体并非易事。

综上，本领域很有必要针对副溶血性弧菌开发特异性好且交叉干扰少的抗体，以满足食品检测等方面的需求。

发明内容

本发明的目的在于提供一种能特异性识别副溶血性弧菌的单克隆抗体及其应用。

一种结合分子，包含以下的氨基酸序列：SEQ ID NO:8所示的重链CDR1，SEQ IDNO:9所示的重链CDR2和SEQ ID NO:10所示的重链CDR3，SEQ ID NO:14所示的轻链CDR1，SEQID NO:15所示的轻链CDR2和SEQ ID NO:16所示的轻链CDR3。

上述结合分子，包含重链可变区，所述的重链可变区具有SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列。

上述结合分子，包含轻链可变区，所述的轻链可变区具有SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列。

在另一优选例中，所述的结合分子包含重链可变区和轻链可变区，其重链可变区和轻链可变区分别具有SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列。

在另一优选例中，所述的结合分子是单克隆抗体。

编码上述结合分子的核酸分子。

上述结合分子在制备用于检测副溶血性弧菌的试剂中的用途。

在本发明的另一方面，提供一种表达载体，所述表达载体中含有编码所述的结合分子的DNA。

在本发明的另一方面，提供一种宿主细胞，所述宿主细胞中含有所述的表达载体。

一种免疫辍合物，其特征在于，所述的免疫辍合物包括：

所述的结合分子；以及与所述结合分子连接的可检测标记物；较佳地，所述可检测标记物包括：荧光标记物、显色标记物；更佳地包括：生物素。