[发明专利]一种可体内示踪的肝肿瘤细胞株及其构建方法

权利要求书

1.一种小鼠肝肿瘤细胞株Hepa1-6-FLuc，其特征在于：稳定携带萤火虫荧光素酶基因（FLuc）及杀稻瘟菌素-s脱氨酶基因（BSD）。

2.如权利要求2所述的小鼠肝肿瘤细胞株Hepa1-6-FLuc，其特征还在于：细胞增殖、克隆形成、迁移、侵袭能力不低于亲代Hepa1-6细胞，转代至10代以上FLuc基因表达水平下降低于5%，体内植入后随着肿瘤细胞的生长Fluc稳定表达。

3.一种如权利要求1所述细胞株的构建方法，采用逆转录病毒将萤火虫荧光素酶基因（FLuc）及杀稻瘟菌素-s脱氨酶基因（BSD）导入细胞，筛选具有稻瘟菌素抗性的细胞，检测细胞中FLuc的表达，获得稳定表达FLuc细胞株；将细胞株植入小鼠体内，活体生物发光成像技术动态检测细胞在体内的生物发光信号，用于细胞体内长时间示踪。

4.如权利要求3所述的细胞株构建方法，包括以下步骤：

（1） 逆转录病毒构建：将Fluc基因克隆至pSEB-Flag质粒，获得携带FLuc基因的pSEB-FLuc质粒，将pSEB-FLuc与pAmpho质粒共转染293细胞，获得逆转录病毒；

（2）细胞构建：逆转录病毒感染目的细胞，经稻瘟菌素抗性加压筛选获得的抗稻瘟菌素的细胞；检测不同代数细胞的Luc活性；

（3）细胞鉴定：以亲代细胞株为对照，检测两种细胞的增殖、克隆形成、迁移、侵袭能力；

（4）细胞体内示踪：将亲代细胞、腺病毒Ad-Fluc感染细胞及FLuc稳定细胞，移植入裸鼠皮下成瘤， 分别于植入后第ld、7d、14d活体组织成像动态观察植入细胞的生长情况，比较荧光信号强度的变化趋势与同一视野白光下的细胞生长，优选的，细胞株为肿瘤细胞，测量瘤体大小并进行细胞体内成瘤模型的组织学鉴定。

5.如权利要求4所述的细胞株构建方法，所述pSEB-Flag质粒的DNA序列为SEQ IDNO.1；所述pSEB-FLuc质粒的DNA序列为SEQ ID NO.2，所述FLuc基因的DNA序列为SEQ IDNO.3，所述BSD基因的DNA序列为SEQ ID NO.4。