[发明专利]一种利用黄曲霉素制备荧光量子点免疫层析检测卡的方法

说明书

一种利用黄曲霉素制备荧光量子点免疫层析检测卡的方法。涉及黄曲霉素，尤其涉及一种利用黄曲霉素制备荧光量子点免疫层析检测卡的方法。提供了方便加工，提高检测速度的利用黄曲霉素制备荧光量子点免疫层析检测卡的方法。本发明中的AFB1免疫荧光量子点检测卡特异性强，检测同族黄曲霉毒素以及其他真菌霉素结果均为阴性。反应时间一般在3‑5 min，与传统的色谱，ELISA等检测方法相比大大缩短了检测时间，提高了检测速度，且彻底摆脱了大型设备的限制。本发明中的检测卡其检测灵敏度达到1 ppb，高于同类型胶体金产品。

技术领域

本发明涉及黄曲霉素，尤其涉及一种利用黄曲霉素制备荧光量子点免疫层析检测卡的方法。

背景技术

量子点标记的免疫层析技术由于具有胶体金免疫层析检测技术的全部优点而且具有更高的灵敏度而受到广泛的关注。量子点主要是由主族元素Ⅱ～Ⅵ，Ⅲ～Ⅴ如CdSe、CdTe、InP组成的纳米颗粒，粒径一般介于1～100 nm 之间。由于电子和空穴被量子限域，连续的能带结构变成具有分子特性的分立能级结构，受激后可以发射荧光。量子点由于存在显著的量子尺寸效应和表面效应，从而使它具有常规材料所不具备的光吸收特性，使其应用领域越来越广，特别是其在临床检验学和免疫学检测研究中的应用价值，引起了科学工作者的极大关注，发光量子点作为荧光探针标记生物大分子，是近年来纳米材料在生物分析领域的重要应用之一。

综合现在的免疫学检测方法，量子点在标记免疫分析方面展现了诱人的前景。将荧光分析与免疫层析相结合应用于现在的免疫层析快速检测，其灵敏性相较于胶体金有较大的提高。另外利用不同粒径量子点具有不同颜色的特点将不同的量子点标记不同的抗体，并且制备成免疫层析试纸条，将有望实现利用一条试纸条同时检测不同的物质，极大的提高了食品安全检测的效率。

基于量子点用于免疫层析快速检测的诸多优势，本发明拟将该技术应用于黄曲霉毒素（Aflatoxin，AFB）在粮食和饲料安全方面的快速检测中，并研发相关的检测试纸条，有较好的市场前景和广泛的社会效益。

黄曲霉毒素中毒（Aflatoxicosis）主要对动物肝脏的伤害，受伤害的个体因动物种类年龄，性别和营养状态而异。研究结果表明黄曲霉毒素可导致肝功能下降，降低牛奶产量和产蛋率并使动物的免疫力降低易受有害微生物的感染。此外，长期食用含低浓度黄曲霉毒素的饲料也可导致胚胎内中毒。通常年幼的动物对黄曲霉毒素更敏感，黄曲霉毒素的临床表现为消化系统功能紊乱降低生育能力，降低饲料利用率，贫血等。

黄曲霉毒素Bl的半数致死量为0.36毫克/公斤体重，属特剧毒的毒物范围（动物半数致死量10毫克/公斤=它的毒性比氰化钾大10倍比砒霜大68倍）。它引起人的中毒主要是损害肝脏，发生肝炎肝硬化，肝坏死等。综上所述，黄曲霉毒素快速检测试纸条的研制，对保障粮食、饲料安全显得尤为关键。

发明内容

本发明针对以上问题，提供了方便加工，提高检测速度的利用黄曲霉素制备荧光量子点免疫层析检测卡的方法。

本发明包括以下步骤：包括以下步骤：

1）材料选择；

2）荧光量子点试剂配方；

3）黄曲霉毒素免疫抗原的合成；

4）黄曲霉毒素特异性抗体的制备；

5）单克隆抗体亲和常数及效价检测；

6）黄曲霉毒素检测抗原合成；

7）荧光微球标记黄曲霉毒素b1抗体的制备；

8）AFB1抗体结合垫制备；

9）黄曲霉毒素b1荧光量子点检测试剂条的制备；

10）完成。

步骤1）中的材料包括MES、NHS、碳二亚胺、 2-（N-吗啉代）乙磺酸、牛血清白蛋白、Tween-20, Tritonx-100、PVP-40；

HAT培养基、荧光微球、羊抗鼠二抗、硝酸纤维膜、玻璃纤维膜和吸水纸。