[发明专利]一种利用黄曲霉素制备荧光量子点免疫层析检测卡的方法

权利要求书

1.一种利用黄曲霉素制备荧光量子点免疫层析检测卡的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）材料选择；

2）荧光量子点试剂配方；

3）黄曲霉毒素免疫抗原的合成；

4）黄曲霉毒素特异性抗体的制备；

5）单克隆抗体亲和常数及效价检测；

6）黄曲霉毒素检测抗原合成；

7）荧光微球标记黄曲霉毒素b1抗体的制备；

8）AFB1抗体结合垫制备；

9）黄曲霉毒素b1荧光量子点检测试剂条的制备；

10）完成。

2.根据权利要求1所述一种利用黄曲霉素制备荧光量子点免疫层析检测卡的方法，其特征在于，步骤1）中的材料包括MES、NHS、碳二亚胺、2-（N-吗啉代）乙磺酸、牛血清白蛋白、Tween-20, Tritonx-100、PVP-40；

HAT培养基、荧光微球、羊抗鼠二抗、硝酸纤维膜、玻璃纤维膜和吸水纸。

3.根据权利要求1所述一种利用黄曲霉素制备荧光量子点免疫层析检测卡的方法，其特征在于，步骤2）包括：

硼砂缓冲液配置：硼酸6.183g，硼酸钠6.864g；超纯水定容至860mL；0.22µm膜滤过，置4℃备用；

0.1M、pH4.7MES缓冲液：19.52gMES，58.44g氯化钠加超纯水至1L，用氢氧化钠调节PH值至4.7，置4℃储存不超过一周；

10% BSA的配制：100.0g BSA；超纯水定容至1000.0mL；0.22µm膜滤过，置4℃备用；

10% PVP-40的配制：100.0g PVP-40；超纯水定容至1000.0mL；0.22µm膜滤过，置4℃备用；

10% Tween-20的配制：100.0mL Tween-20；超纯水稀释定容至1000.0mL；0.22µm膜滤过，置4℃备用；

10% 叠氮钠的配制：100.0g 叠氮钠；超纯水定容至1000.0mL；0.22µm膜滤过，置4℃备用；

玻璃器皿清洁液：重铬酸钾1000g，浓硫酸2500mL，加蒸馏水至10000mL；

抗体标记物稀释缓冲液的配制：取50g 蔗糖于250mL试剂瓶中，加入5mL10%BSA，3mL10%Tween-20，2mL10%PVP-40，0.2M PH7.4 PB定容至100mL，加入200uL10%叠氮钠；

玻纤垫片处理液的配置：称取海藻糖30.0g、BSA 5g、蔗糖15g于1000mL试剂瓶中，加入0.02mol/L PBS(pH7.4)100mL，5mL山羊血清，3.1mL Triton-100，加超纯水定容至1L；

样品垫处理液的配置：称取海藻糖1.8g、BSA 6g、酪蛋白2.5g、BRIJ-35 5g、PVP-k405.4g、Na₂HPO₄ 13.578g_、NaH₂PO₄ 2.8g、NaCl 4.015g于1000mL试剂瓶中，加入5mL Tween-20，加超纯水定容至1L；

抗原、二抗稀释液的配置：称取2g海藻糖于250mL试剂瓶中，加入1mL甲醇、5mL10%丙三醇，加0.02mol/L PBS定容至100mL；

0.2 mol/LPB：称取 2.3gNa₂HPO₄和0.456g NaH₂PO₄，加超纯水溶解后定容至1000mL，高压灭菌20min后常温保存，工作液pH值7.4；

0.02mol/L PBS称取 17.4g NaCl，2.3gNa₂HPO₄和0.456g NaH₂PO₄，加超纯水溶解后定容至1000mL，高压灭菌20min后常温保存，工作液pH值7.4；

5%二氯二钾硅烷的氯仿溶液：将25mL 二氯二钾硅烷溶解在 475mL 的氯仿溶液中，密封保存。