[发明专利]安乃近人工抗原的合成方法

权利要求书

1.安乃近人工抗原的合成方法，其特征是：采用戊二醛法将4-氨基安替比林H1与载体蛋白偶联，得到安乃近的人工抗原。

2.根据权利要求1所述安乃近人工抗原的合成方法，其特征在于步骤如下：

（1）A液的制备：称取4-氨基安替比林H1 2.03 mg，溶解在500 μL超纯水中，再加入60 μL 2.5% 戊二醛溶液，冰浴搅拌15 min，得反应液A液；

（2）B液的制备：称取5mg BSA，用1mL 0.01M pH=7.4的磷酸盐缓冲溶液PBS溶解，得B液；

（3）偶联：将A液逐滴加入到B液中，边滴加边搅拌，室温搅拌反应2h，得偶联混合液；

（4）透析：取10cm蛋白截留为3kDa的透析袋，煮沸5 min，冷却至室温后，将偶联混合液加入透析袋中，并用pH=7.4、0.01M PBS透析3天，每6 h更换一次透析液，除去多余的小分子化合物，得到安乃近的人工抗原H1-BSA，采用紫外吸收扫描方法鉴定。

3.安乃近人工抗原的合成方法，其特征是：先由4-氨基安替比林H1和丁二酸酐反应得到安乃近半抗原H1-HS，再用碳二亚胺法将安乃近半抗原H1-HS与载体蛋白偶联，即得到安乃近人工抗原。

4.根据权利要求3所述安乃近人工抗原的合成方法，其特征在于步骤如下：

（1）安乃近半抗原的合成：称取4-氨基安替比林H1 50mg，4-二甲氨基吡啶175 mg，丁二酸酐300mg，溶于20mL无水吡啶，60℃回流12h；所得反应液蒸发浓缩，取残留物溶解在10mL水中，并用5mL乙酸乙酯萃取三次，收集有机相；有机相经氮气吹干后，得到白色固体，即为安乃近半抗原H1-HS；

（2）完全抗原的制备：称取步骤（1）制得的安乃近半抗原H1-HS 1.1 mg，N-羟基琥珀酰亚胺NHS 1.3 mg，溶解于300μL N,N-二甲基甲酰胺DMF中，室温搅拌反应10min；再称取1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐EDC 2.2 mg，用50μL pH为4.6，0.01M 2-(n-吗啉)乙基磺酸缓冲溶液MES充分溶解后，加入到上述H1-HS溶液中，室温搅拌反应6-8h，得A液；取5mg KLH用0.01M PBS溶解，得B液；再逐滴将A液缓慢加入到B液中，室温搅拌反应过夜，得偶联物混合液；混合液在0.01M PBS 溶液中透析三天，最终得到安乃近人工抗原H1-HS-KLH，采用紫外吸收扫描方法鉴定。