[发明专利]单增李斯特菌的PCR检测试剂盒及检测方法

说明书

本发明公开了一种单增李斯特菌的PCR检测试剂盒及检测方法，检测试剂盒包括基因ORF2819、基因ORF2110、基因1mo0737、基因1mo1118和基因plcA五种基因的正向引物、反向引物和探针。本发明运用单增李斯荧光定量PCR分型检测试剂盒检测单增李斯特菌的血清型，与传统的免疫血清方法相比具有方便、快速、准确、灵敏、安全等优点，可应用于单增李斯特菌的快速分型检测、早期快速诊断单增李斯特菌的感染并及时指导临床治疗。

技术领域

本发明涉及生物检测技术领域，更具体地，涉及一种单增李斯特菌的PCR检测试剂盒及检测方法。

背景技术

单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes，LM)，简称单增李斯特菌，是兼性胞内寄生的人畜共患致病菌，广泛存在于自然界中，肉制品、海产品、奶制品等都有可能引起李斯特菌疾病的爆发。该菌可通过穿透肠道屏障、血脑屏障和胎盘屏障而引起胃肠炎、败血症、脑膜炎、流产等。单增李斯特菌的主要易感人群包括孕妇、新生儿、免疫低下人群和老年人等。20世纪80年代初单增李斯特菌被列为食源性致病菌，2002年世界卫生组织(World Health Organization，WHO)将单增李斯特菌列为继大肠杆菌O157、沙门氏菌、志贺氏菌之后第四大重要食源性致病微生物。全球几乎每年都有关于单增李斯特菌感染或暴发事件的报道。单增李斯特菌根据菌体(O)抗原和鞭毛(H)抗原的特异性不同，分为16个血清型(1/2a、1/2b、1/2c、3a、3b、3c、4a、4ab、4b、4c、4d、4e、5、6a、6b、7)。1/2a、1/2b、1/2c、4b四个型均可感染人类，其中以4b、1/2a血清型为主。不同血清型的单增李斯特菌的鉴别，对建立菌株与临床表现之间的关联、对细菌进行监测和溯源、有效预防李斯特菌病的传播具有重要意义。

目前，单增李斯特菌血清型别鉴定方法包括血清凝集法、脉冲场电泳、飞行质谱以及多重PCR方法等。这几个方法都有一些共同的缺点，包括耗时长、操作繁琐、需要熟练的专业技术人员等，其中脉冲场电泳和飞行质谱对仪器的要求也非常高。实时荧光定量PCR在基础科学研究、临床诊断、疾病研究及药物研发等领域都有广泛应用，其具有特异性强、灵敏度高、重复性好、检测速度快、自动化程度高等特点。因此建立基于荧光定量PCR的分型检测方法对于单增李斯特菌血清鉴别及监测具有重要意义。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种单增李斯特菌的PCR检测试剂盒，所述检测试剂盒包括：

基因ORF2819的正向引物：ATGACCATAGCGTCCAATTGAG；

基因ORF2819的反向引物：GCATGAATTGCATGCTATAATC；

基因ORF2819的探针：CTAGATCGATATCAGTACTTCGCAGTATCC，荧光标记为5`6-FAM；

基因ORF2110的正向引物：CACGCACTAATCTGACTATAAACTC；

基因ORF2110的反向引物：TGCACACAGAGAGCAGATAG；

基因ORF2110的探针：TTCATTTGTTCCCAACACCTCCGCGTTTC，荧光标记为5`HEX；

基因lmo0737的正向引物：GCATCCATCTTAGATCTCAGGAAGATC；

基因lmo0737的反向引物：GAGTAGTGTAGGTTGCACGC；

基因lmo0737的探针：ACTTTCTCACCAACTCAACC，荧光标记为5`6-FAM；

基因lmo1118的正向引物：CTTATACCTCGCCAGGATTTAATATTGACC；

基因lmo1118的反向引物：CAGATATCACCACGAAATTCAAAG；