[发明专利]单增李斯特菌的PCR检测试剂盒及检测方法

权利要求书

1.一种单增李斯特菌的PCR检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂盒包括：

基因ORF2819的正向引物：ATGACCATAGCGTCCAATTGAG；

基因ORF2819的反向引物：GCATGAATTGCATGCTATAATC；

基因ORF2819的探针：CTAGATCGATATCAGTACTTCGCAGTATCC，荧光标记为5`6-FAM；

基因ORF2110的正向引物：CACGCACTAATCTGACTATAAACTC；

基因ORF2110的反向引物：TGCACACAGAGAGCAGATAG；

基因ORF2110的探针：TTCATTTGTTCCCAACACCTCCGCGTTTC，荧光标记为5`HEX；

基因lmo0737的正向引物：GCATCCATCTTAGATCTCAGGAAGATC；

基因lmo0737的反向引物：GAGTAGTGTAGGTTGCACGC；

基因lmo0737的探针：ACTTTCTCACCAACTCAACC，荧光标记为5`6-FAM；

基因lmo1118的正向引物：

CTTATACCTCGCCAGGATTTAATATTGACC；

基因lmo1118的反向引物：CAGATATCACCACGAAATTCAAAG；

基因lmo1118的探针：CCTTATTGTGCCTCTTATCCTGAGACTCTC，荧光标记为5`HEX；

基因plcA的正向引物：TCAAGTCCATATCAAGTCTTGGATTA；

基因plcA的反向引物：TCGAAGCTAAGATTTCTCTTGACT；

基因plcA的探针：TCCCTTTCACGGCAATATCAAGGTTC，荧光标记为5`Cy5。

2.根据权利要求1所述的单增李斯特菌的PCR检测试剂盒在检测单增李斯特菌中的应用。

3.一种单增李斯特菌的PCR检测方法，其特征在于，使用权利要求1所述的检测试剂盒，包括如下步骤：

样品处理得到待测样品基因组DNA；

实时荧光PCR检测，将待测样品基因组DNA、阳性对照和/或隐性对照分别加入装有所述检测试剂盒的荧光定量PCR仪，进行PCR反应；

PCR反应结束后，进行结果判断。

4.根据权利要求3所述单增李斯特菌的PCR检测方法，其特征在于，所述样品处理得到待测样品基因组DNA，进一步为，

取待测样品DNA提取液，2000rpm离心10s后备用；

取1mL样品自然沉降后的上清液加入到1.5mL无菌离心管中，12000rpm离心5min后弃上清，保留沉淀；

每管沉淀中加入DNA提取液50μL，将沉淀悬浮后100℃加热处理5min；

12000rpm离心2min，取上清得到带刺样品基因组DNA。

5.根据权利要求3所述单增李斯特菌的PCR检测方法，其特征在于，所述PCR反应条件包括：

第一阶段，50-55℃，2-10min；

第二阶段，94-95℃，2-3min；

第三阶段，94-95℃，5-10S；

第四阶段，55-60℃，40-80S；

设定为45个循环。

6.根据权利要求3所述单增李斯特菌的PCR检测方法，其特征在于，所述PCR反应结束后，进行结果判断，进一步为，

根据扩增图谱判定结果，阳性结果：扩增曲线图Ct值≤40，并有明显指数增长，阴性结果：扩增曲线图Ct值＞40或无Ct值，其中Ct值是指每个PCR反应管内的荧光信号到达设定的域值时所经历的循环数。