[发明专利]一种北芪菇蛋白源抗氧化肽的制备方法

说明书

本发明公开了一种北芪菇蛋白源抗氧化肽的制备方法，包括以下步骤：S1：碱溶酸沉法提取北芪菇蛋白；S2：北芪菇蛋白的酶解；S3：蛋白酶的筛选；S4：加酶方式的选择；S5：加酶比例的选择；S6：单因素试验；S7：响应面试验；S8：DPPH自由基清除率的测定；S9水解度的测定；S10：ABTS和清除率试验；S11：总还原力试验；S12分析计算。本发明本发明以北芪菇蛋白为原料，以两种蛋白酶复合的方式高效获得抗氧化性多肽，探究制备北芪菇蛋白抗氧化性多肽的最佳工艺条件，为北芪菇蛋白的深加工和抗氧化肽的发展提供基础。

技术领域

本发明涉及北芪菇蛋白技术领域，具体为一种北芪菇蛋白源抗氧化肽的制备方法。

背景技术

北芪菇中含有大多数氨基酸、蛋白质、有机酸、糖类、生物碱、植物甾醇、黄酮类及苷类、三萜成分等等，北芪菇中含有蛋白源抗氧化肽，抗氧化肽是一种生物体内的活性肽。在生物体内，通过各种化学反应，水解蛋白质得到各种多肽，有的多肽具有抗氧化效应，它能减少自由基的数量，减轻自由基对身体的影响。抗氧化肽安全性高，对人体没有危害，功能性强，可以有效防止脂质氧化。经过研究，自由基可能引起细胞的衰老和死亡，进而导致色斑，皱纹和某些皮肤病，也会使食品氧化酸败，因此将抗氧化肽应用在食品加工中，能延长食品的保质期，减少自由基对身体的损害。

现缺少一种对北芪菇蛋白源抗氧化肽制备的工艺方法，传统的制备方式抗氧化性多肽的DPPH自由基清除率并不理想，加工工艺条件较差，影响对北芪菇蛋白的深加工研究和发展。

发明内容

本发明的目的在于提供一种北芪菇蛋白源抗氧化肽的制备方法，以解决上述背景技术中提出的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种北芪菇蛋白源抗氧化肽的制备方法，包括以下步骤：

S1：碱溶酸沉法提取北芪菇蛋白，具体步骤如下：

1)将晒干的北芪菇放入粉碎机中打磨成粉，称取5g的北芪菇干粉，加60ml蒸馏水于100ml试管中充分溶解，用0.5mol/L的氢氧化钠溶液将pH值调至8.0；

2)将溶液移入两个50ml相同规格的离心管中，放入离心机中，调整离心速度为2700r/min，开始离心，5min后取出，转移上清液至100ml试管中，加盐酸将pH值调至4.5；

3)再次调整离心速度为5000r/min，开始离心，15min后取出，去掉上清液，得到蛋白质沉淀物；

S2：北芪菇蛋白的酶解，具体步骤如下：

1)配制浓度2％的北芪菇蛋白溶液，在pH为7-8，温度在35-45℃条件下，根据加酶量加入蛋白酶，放入恒温水浴锅中水解1-2h；

2)放入95℃的水浴锅中灭酶15min，最后以5000r/min的速度离心15min得到上清液，此上清液即是北芪菇蛋白酶解液；

S3：蛋白酶的筛选，具体步骤如下：

1)选取了木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶、中性蛋白酶和胰蛋白酶，在浓度2％，酶解时间2h，加酶量5000U/g，进行酶解试验；

2)将检测指标设定为DPPH自由基清除率和水解度，筛选得到两种最佳蛋白酶；

S4：加酶方式的选择，具体步骤如下：

1)在筛选出最佳的两种蛋白酶之后，两种酶在各自最适温度和pH值下水解，以及两种酶以1∶1混合，在两种酶各自最适温度和pH值下分别水解，水解条件为浓度2％，酶用量5000U/g，时间2h；

2)测定水解度指标并记录，测定抗氧化肽的DPPH自由基清除率指标并记录，得到最佳加酶方式；

S5：加酶比例的选择，具体步骤如下：