[发明专利]一种RS1-KO小鼠模型的构建方法及其应用

说明书

本发明提供了一种试剂，所述试剂包括基因编辑器和gRNA，所述gRNA特异性结合RS1基因，优选地所述gRNA的靶向位点序列sgRNA1和/或sgRNA2，所述sgRNA1如SEQ ID NO:1所示，所述sgRNA2如SEQ ID NO:2所示。本发明还提供了一种利用本发明所述的试剂制备的分离细胞和非人哺乳动物及其制备方面。本发明提供了优化的造模方案，一方面模型得率高，整体胚胎的质量好，并且具有敲除率高、无外源基因片段导入的优点，另一方面小鼠模型视网膜多层变薄劈裂、病理表现更严重，并且与人的视网膜劈裂症表型更类似，是一种不引入外源基因的而有效的X连锁视网膜劈裂症模型非人哺乳动物模型。

技术领域

本发明涉及分子生物学与生物医学技术领域，具体地说，是一种RS1-KO 小鼠模型的构建方法及其应用。

背景技术

X连锁视网膜劈裂症(X-Linked juvenile Retinoschisis，XLRS)是一种罕见的遗传性致盲性眼病,发病率约为1:5000～1:25000。XLRS主要累及双侧视网膜,在视网膜神经纤维层和神经节细胞层之间出现劈裂腔，导致严重的视力下降。此病常发于男性，是引起男性青少年黄斑变性的最主要原因,女性作为携带者无特征性临床表现。

现有的X连锁视网膜劈裂症模型动物，均在模型细胞基因组中引入了外源基因，而外源基因对动物基因组的影响是不可估量的。

因此，本领域急需一种不引入外源基因的而有效的X连锁视网膜劈裂症模型非人哺乳动物模型。

发明内容

本发明的目的是提供一种不引入外源基因的而有效的X连锁视网膜劈裂症模型非人哺乳动物模型。

在本发明的第一方面提供了一种试剂，其特征在于，包括：

(a)基因编辑蛋白或其表达载体，所述基因编辑蛋白选自下组：CasRx、 Cpf1、Cas9、Cas 13a、Cas13b、Cas13c、或其组合；和

(b)gRNA或其表达载体，其中所述gRNA是引导所述基因编辑蛋白特异性结合RS1基因的RNA。

另一优选例中，所述gRNA的靶向位点序列sgRNA1和/或sgRNA2，所述sgRNA1 的靶向核酸序列如SEQ ID NO:1所示，所述sgRNA2的靶向核酸序列如SEQ ID NO:2 所示。

在另一优选例中，所述gRNA引导基因编辑蛋白特异性结合于RS1基因的核苷酸序列。

在另一优选例中，所述组分(a)和/或(b)中的所述表达载体包括病毒载体。

在另一优选例中，所述的病毒载体选自下组：腺相关病毒(AAV)、腺病毒、慢病毒、逆转录病毒、疱疹病毒、SV40、痘病毒、或其组合。

在另一优选例中，所述的病毒载体选自下组：慢病毒、腺病毒、腺相关病毒 (AAV)、或其组合，较佳地，所述载体为腺相关病毒(AAV)。

在另一优选例中，所述试剂的剂型选自下组：冻干制剂、液体制剂、或其组合。

在另一优选例中，所述试剂的剂型为液体制剂。

在另一优选例中，所述试剂的剂型为注射剂型。

在另一优选例中，所述基因编辑蛋白的表达载体和gRNA的表达载体为同一载体或不同载体。

在另一优选例中，所述组分(a)与组分(b)的重量比为100:1-0.01:1，较佳地，10:1-0.1:1，更佳地，2:1-0.5:1。

在另一优选例中，所述组合物中，所述组分(a)的含量为0.0001-99wt％，较佳地，0.1-90wt％，更佳地，1-70wt％。