[发明专利]一种Diels-Alder反应酶的应用及其突变体的制备方法与应用

权利要求书

1.一种Diels-Alder反应酶或其编码基因或含有该编码基因的生物材料在催化Diels-Alder反应合成含有六元环骨架的非天然D-A产物中的应用，所述Diels-Alder反应酶来源于桑树，命名为MaDA酶，其氨基酸序列如SEQ ID No.1所示；所述催化Diels-Alder反应是以亲二烯体和非天然二烯体为底物进行的合成反应，所述非天然二烯体为苯酚类、联苯类、黄酮类、苯并杂环类；所述生物材料为表达盒、质粒、载体、微生物、昆虫细胞、植物细胞。

2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，编码所述Diels-Alder反应酶的基因，其核苷酸序列如SEQ ID No.2所示。

3.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述生物材料为表达载体pI-sec-sumostar-tev2，其核苷酸序列如SEQ ID No.3所示。

4.一种D-A反应方法，其特征在于，以SEQ ID No.1所示的氨基酸序列的MaDA酶为反应酶，以查尔酮或其衍生物和非天然二烯体化合物为底物进行合成反应，所述非天然二烯体为苯酚类、联苯类、黄酮类、苯并杂环类。

5.一种Diels-Alder反应酶的突变体，所述Diels-Alder反应酶来源于桑树，命名为MaDA酶，其氨基酸序列如SEQ ID No.1所示；所述突变体为SEQ ID No.1所示氨基酸序列的以下任一种：

(1)第292位的F突变为A；

(2)第357位的N突变为A；

(3)第358位的L突变为A；

(4)第374位的N突变为A。

6.权利要求5所述突变体的编码基因。

7.含有权利要求6所述编码基因的生物材料，所述生物材料为表达盒、质粒、载体、微生物、昆虫细胞、植物细胞。

8.权利要求5所述的突变体或其编码基因或权利要求7所述的生物材料在催化Diels-Alder反应中的应用；所述催化Diels-Alder反应是以亲二烯体和非天然二烯体为底物进行的合成反应，所述非天然二烯体为苯酚类、联苯类、黄酮类、苯并杂环类。

9.权利要求5所述的突变体或其编码基因或权利要求7所述的生物材料在合成天然或非天然D-A产物中的应用；所述天然或非天然D-A产物是以亲二烯体和非天然二烯体为底物进行的合成反应得到的，所述非天然二烯体为苯酚类、联苯类、黄酮类、苯并杂环类。