[发明专利]人源化4-1BB单克隆抗体及其药物组合物

说明书

本发明涉及一种人源化的4‑1BB单克隆抗体、其抗原结合片段、其药物组合物以及医药用途。该单克隆抗体包含：选自SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列的CDR1，选自SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列的CDR2，SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列的CDR3，SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列的CDR1’，SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列的CDR2’，SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列的CDR3’。该单克隆抗体以高度亲和性和特异性与人4‑1BB结合，导致T细胞增殖和TNF‑γ生成均显著增加，增强和刺激人4‑1BB介导的免疫反应。

技术领域

本发明涉及人源化的4-1BB单克隆抗体、其抗原结合片段、其药物组合物以及医药用途。

背景技术

4-1BB（也称为CD137或TNFRSF9）属于TNFR超家族，分子量50-55 kDa，表达于T细胞、NK细胞，NKT细胞、树突细胞（DC）、Tregs以及PDCA+ B细胞上。4-1BB与表达于APC细胞上的高亲和性配体4-1BBL结合，从而促进T细胞增殖，增强细胞因子生成，并阻止激活诱导的细胞死亡（AICD）。

激动性抗4-1BB单克隆抗体（mAb）对各种自身免疫疾病和病毒感染具有显著的抑制作用。许多研究表明，4-1BB在类风湿性关节炎（RA）的发病机制中扮演重要角色。在RA病人中，可溶性4-1BB和4-1BBL的水平均高于健康人群，并且它们的水平与疾病严重程度相关。在抗4-1BB抗体治疗的关节炎小鼠中，大量出现共表达CD11c标记物的CD8+ T细胞亚群。该CD11c+CD8+ T细胞被证实是关节炎症状减轻的原因。进一步研究证实，4-1BB抗体诱导的CD11c+CD8+ T细胞表达高水平的IFN-γ。实验性自身免疫性葡萄膜视网膜炎（EAU）是一种眼血管层的炎症性疾病，可导致视力受损，甚至失明。研究表明，4-1BB抗体与一种EAU诱导剂（IRBP）一同给药使CD11c+CD8+IFN-g+ T细胞和IDO+DC大量扩增，共同抑制病原性CD4+ T细胞。此外，4-1BB抗体还被用来治疗其他自身免疫疾病，包括多发性硬化（MS）、I型糖尿病（T1D）和狼疮。研究还发现，4-1BB抗体可以干扰某些病毒感染，如HSV-1，日本乙型脑炎病毒（JEV）、牛痘病毒、淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒（LCMV）。

4-1BB抗体体内抗肿瘤效果是Melero等在1997年首次发现，抗4-1BB抗体抑制小鼠体内低免疫原性肉瘤和高免疫原性肥大细胞瘤的生长。随后，研究者们证实，4-1BB抗体单独或与其他抗肿瘤药物可发挥强大的抗肿瘤作用。当4-1BB抗体被注射至SCID肿瘤小鼠时，肿瘤生长显著受到抑制。4-1BB抗体处理携带肉瘤细胞或胶质瘤细胞的小鼠，可延长小鼠的生存期并且导T细胞依赖性的致肿瘤退化。而且，4-1BB抗体还显示出在内皮肿瘤、肾细胞瘤、肺癌中的治疗作用。此外，大量研究显示，当4-1BB抗体与其他抗癌剂联合使用时，它们具有更佳的效果。例如，4-1BB抗体/PD-1抗体组合、4-1BB抗体/CTLA-4抗体组合、4-1BB抗体/GM-CSF组合、4-1BB抗体/CD40抗体组合、顺铂/4-1BB抗体组合、环磷酰胺/4-1BB抗体组合、4-1BB抗体/细胞因子诱导的杀伤细胞组合、4-1BB抗体/CD4+ T细胞消除组合、IL-2/4-1BB抗体组合，等等。当与其他抗癌剂联合使用时，4-1BB抗体介导的抗肿瘤作用会被放大，这为治疗癌症提供了新的思路。4-1BB抗体的变体，例如4-1BB抗体的ScFv，也具有显著的抗肿瘤效果，肿瘤内注射抗4-1BB ScFv抑制Hepa 1-6肿瘤，这种抗肿瘤作用依赖于增加的IFN-γ以及T细胞对肿瘤的渗透增加。

但是，目前4-1BB抗体还没有上市，多项临床研究都以失败告终，体内效果不理想和严重副作用（包括肝毒性、血小板减少、白细胞减少等）是其失败的主要原因。目前仅有两项4-1BB单抗处于临床试验中，分别是百时美施贵宝公司的完全人源化的Urelumab，以及辉瑞公司的PF2566。因此，有必要提供更多的4-1BB抗体以满足市场需求。

发明内容