[发明专利]一种非洲猪瘟基因工程疫苗高密度发酵补料培养基及发酵工艺有效
| 申请号： | 201911131823.7 | 申请日： | 2019-11-19 |
| 公开（公告）号： | CN111254103B | 公开（公告）日： | 2023-06-02 |
| 发明（设计）人： | 王云龙;李玉林;毕胜利;伊瑶;范雪亭;张怡青;程蕾;王继创;王国强 | 申请（专利权）人： | 河南省生物工程技术研究中心;郑州倍赛泰生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N1/21 | 分类号： | C12N1/21;C12P21/02;C12R1/19 |
| 代理公司： | 郑州铭晟知识产权代理事务所(特殊普通合伙) 41134 | 代理人： | 张鹏 |
| 地址： | 450018 河南省郑*** | 国省代码： | 河南;41 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 非洲 猪瘟 基因工程 疫苗 高密度 发酵 培养基 工艺 | ||
1.一种非洲猪瘟基因工程疫苗高密度发酵补料培养基，其特征在于，所述补料培养基包括葡萄糖40-280g/L、甘氨酸50-300g/L、MgSO4 20g/L和（NH4）2SO4 20g/L；所述非洲猪瘟基因工程疫苗高密度发酵工艺的基础培养基为LB液体培养基，所述非洲猪瘟基因工程疫苗的氨基酸序列包括下述片段：TKPRKKMDSEFFQPVYPRHYGECLSPVTTPSFFSTHMYTILGGGSGGGRRNIRFKPWFIPGVINEISLTNNELYINNLFVTPEIHNLFVKRVRFSLIRVHKTQGGGSGGGNETNECTSSFETLFEQEPSSEKKTYQRTRALVGGGSGGG。
2.根据权利要求1所述的非洲猪瘟基因工程疫苗高密度发酵补料培养基，其特征在于，所述补料培养基中包含葡萄糖80-280g/L和甘氨酸100-300g/L、MgSO4 20g/L和（NH4）2SO420g/L。
3.根据权利要求2所述的非洲猪瘟基因工程疫苗高密度发酵补料培养基，其特征在于，所述补料培养基包括葡萄糖160g/L和甘氨酸200g/L、MgSO4 20g/L和（NH4）2SO4 20g/L。
4.一种非洲猪瘟基因工程疫苗高密度发酵工艺，其特征在于，在发酵罐培养表达所述非洲猪瘟基因工程疫苗的重组大肠杆菌的过程中，采用一次性补料的方式补加如权利要求1-3中任意一项所述的非洲猪瘟基因工程疫苗高密度发酵补料培养基。
5.根据权利要求4所述的非洲猪瘟基因工程疫苗高密度发酵工艺，其特征在于，所述非洲猪瘟基因工程疫苗高密度发酵工艺在进行发酵罐培养前还包括如下工艺：（1）菌种活化；（2）种子培养；（3）摇瓶培养；（4）将摇瓶培养液接种于发酵罐中进行发酵培养；所述菌种活化的方法为：将保存于-70℃菌株管内的用于表达所述非洲猪瘟基因工程疫苗的重组大肠杆菌转接到斜面培养基上，并在37℃环境中过夜培养，之后再在37℃、225r/min条件下二次摇瓶活化菌株10h，随后接种于含卡那霉素的平板培养基上，4℃环境下保存。
6.根据权利要求5所述的非洲猪瘟基因工程疫苗高密度发酵工艺，其特征在于，所述种子培养的步骤为：用接种环在含有卡那霉素的平板上挑取单菌落，采用划线接种方式转移菌种至已灭菌种子培养基内，37℃、220r/min振荡培养14-16h；所述摇瓶培养的步骤为：将经所述种子培养后的重组大肠杆菌转移入摇瓶培养基，37℃、220r/min振荡培养至摇瓶培养液OD值达到0.6-1.5。
7.根据权利要求6所述的非洲猪瘟基因工程疫苗高密度发酵工艺，其特征在于，所述摇瓶培养至摇瓶培养液OD值达到0.8-1.0。
8.根据权利要求5所述的非洲猪瘟基因工程疫苗高密度发酵工艺，其特征在于，将经所述摇瓶培养得到的摇瓶培养液按照1:15的比例接种于发酵罐中。
9.根据权利要求4所述的非洲猪瘟基因工程疫苗高密度发酵工艺，其特征在于，当发酵罐中所述重组大肠杆菌生长至对数生长中后期时，使用诱导剂IPTG诱导培养。
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