[发明专利]一种酵素中有机酸的快速检测方法

说明书

本发明涉及一种酵素中有机酸的快速检测方法，包括如下步骤：(1)配置标准品有机酸甲酯混合物；(2)酵素中有机酸的提取；(3)配置待测有机酸甲酯混合物；(4)采用气相色谱‑质谱测定：取标准品有机酸甲酯混合物、待测有机酸甲酯混合物进样分析，采用外标法计算各检出有机酸的相对百分含量。本发明通过优化酵素中有机酸的提取和甲酯化衍生方法，通过离心分离出酵素中的可溶性杂质沉淀，采用硫酸‑甲醇溶液甲酯化得到有机酸甲酯混合物，进而通过GC‑MS联用法，分析酵素中有机酸的含量，快速简便，微量分析，灵敏度高。

技术领域

本发明属于检测分析技术领域，具体涉及一种利用气相色谱质谱联用仪用技术分析酵素中有机酸的成分及其含量的方法。

背景技术

酵素是以新鲜的蔬菜、水果、糙米、药食同源中药等植物为原料，经过榨汁或萃取一系列工艺后，再添加酵母菌、乳酸菌等发酵菌株进行发酵所产生的含有丰富的糖类、有机酸、矿物质、维生素、酚类、萜类等营养成分以及一些重要的酶类等生物活性物质的混合发酵液。

酵素的发展主要是由于酵素中各种短链脂肪酸的存在，短链脂肪酸被后肠迅速吸收后，既储存了能量又降低了渗透压，并且短链脂肪酸对于维持大肠的正常功能和结肠上皮细胞的形态和功能具有重要作用。短链脂肪酸还可促进钠的吸收，丁酸在这方面的作用比乙酸和丙酸更强并且丁酸可增加乳酸杆菌的产量而减少大肠杆菌的数量。

气相色谱法(GC)虽然在很多食品成分分析方面得到应用，但当酵素中有机酸组成复杂时，会增加样品的定性难度。与GC相比，GC-MS(气质联用法)测定有机酸近十年得到了应用，该方法灵敏度高，分析快速，精确度高适合于同时测定多组分有机酸甲酯待测样品。使用GC或GC-MS分析有机酸中羧酸类成分时，由于羧酸的极性强，容易和色谱柱相吸附，导致实验结果不准确。此外，有机酸中的长链有机酸的沸点高、高温条件时挥发性差、影响有机酸分离效果，当GC分析时温度过高会损伤色谱柱，所以，为避免上述干扰影响测定结果，并延长色谱柱寿命，一般需先将有机酸提取，再经甲酯化等前处理，目前现有甲酯化方法普遍是常温甲酯化，费时较长需要24h，本方法使用水浴加热甲酯化处理，仅需要1-2h十分快捷，得到该有机酸对应的有机酸甲酯，而后上机分析，并通过换算计算有机酸的含量。而目前还没有关于酵素中有机酸的检测方法。

发明内容

本发明克服了现有技术中的不足，在于提供一种酵素中有机酸的快速检测方法，能够在样品量较少的情况下，快速准确的检测出酵素中有机酸的含量。

本发明的具体技术方案如下：

一种酵素中有机酸的快速检测方法，包括如下步骤：

(1)配置标准品有机酸甲酯混合物；

(2)酵素中有机酸的提取：取酵素样品于离心管中离心，分离其中杂质，得到含有有机酸的酵素上清液；

(3)取步骤(2)中得到的酵素上清液于离心管中，加入硫酸-甲醇溶液，水浴加热，再加入二氯甲烷，饱和NaCl，混匀、静置分层，吸取二氯甲烷有机相，使用滤头进行过滤，得待测有机酸甲酯混合物；

(4)采用气相色谱-质谱测定：取步骤(1)中标准品有机酸甲酯混合物、步骤(3)中得到的待测有机酸甲酯混合物进样分析，采用外标法计算各检出有机酸的相对百分含量。

优选的，配置标准品有机酸甲酯混合物包括如下步骤：取各有机酸标准液于离心管中，加入硫酸-甲醇溶液，水浴加热，再加入二氯甲烷，饱和NaCl，混匀、静置分层，吸取二氯甲烷有机相，使用滤头进行过滤，得标准品有机酸甲酯混合物。

优选的，步骤(2)中，离心管置于10000～14000r/min离心机中离心3～4分钟。

优选的，步骤(2)中，取1.5mL酵素样品于1.5mL离心管中离心。

优选的，步骤(3)中，水浴加热的加热温度为55～65℃，加热时间为1.5～2.5h。