[发明专利]一种酵素中有机酸的快速检测方法

权利要求书

1.一种酵素中有机酸的快速检测方法，其特征在于包括如下步骤：

(1)配置标准品有机酸甲酯混合物；

(2)酵素中有机酸的提取：取酵素样品于离心管中离心，分离其中杂质，得到含有有机酸的酵素上清液；

(3)取步骤(2)中得到的酵素上清液于离心管中，加入硫酸-甲醇溶液，水浴加热，再加入二氯甲烷，饱和NaCl，混匀、静置分层，吸取二氯甲烷有机相，使用滤头进行过滤，得待测有机酸甲酯混合物；

(4)采用气相色谱-质谱测定：取步骤(1)中标准品有机酸甲酯混合物、步骤(3)中得到的待测有机酸甲酯混合物进样分析，采用外标法计算各检出有机酸的相对百分含量。

2.根据权利要求1所述的快速检测方法，其特征在于，配置标准品有机酸甲酯混合物包括如下步骤：取各有机酸标准液于离心管中，加入硫酸-甲醇溶液，水浴加热，再加入二氯甲烷，饱和NaCl，混匀、静置分层，吸取二氯甲烷有机相，使用滤头进行过滤，得标准品有机酸甲酯混合物。

3.根据权利要求1或2所述的快速检测方法，其特征在于步骤(2)中，离心管置于10000～14000r/min离心机中离心3～4分钟。

4.根据权利要求3所述的快速检测方法，其特征在于步骤(2)中，取1.5mL酵素样品于1.5mL离心管中离心。

5.根据权利要求1或2所述的快速检测方法，其特征在于步骤(3)中，水浴加热的加热温度为55～65℃，加热时间为1.5～2.5h。

6.根据权利要求5所述的快速检测方法，其特征在于步骤(3)中，硫酸-甲醇溶液的体积比为13％，所使用的滤头孔径为0.45um。

7.根据权利要求6所述的快速检测方法，其特征在于步骤(3)中，取步骤(1)中得到的酵素上清液1mL于50mL离心管中，加入硫酸-甲醇溶液10mL，水浴加热，再加入二氯甲烷5mL，饱和NaCl5ml，震荡混匀、静置分层，吸取二氯甲烷有机相，使用滤头进行过滤，得待测有机酸甲酯混合物。

8.根据权利要求1或2所述的快速检测方法，其特征在于步骤(4)中，气相色谱-质谱条件为：进样口温度为260℃，离子源为250℃，气质接口为280℃，进样量1.0uL，分流比10:1，吹扫流量3.0ml/min；气相色谱柱温箱升温程序为：40℃保持5min，然后以10℃/min升温至280℃保持5min，载气为99.999％高纯度氦气；质谱条件：离子源EI源，电子能量70eV，接口温度250℃，离子源温度230℃，四级杆温度280℃，进样口温度250℃，质量扫描范围m/z30-450，采集方式Scan。