[发明专利]一种检测人18个基因的转录产物的复合扩增试剂盒及其应用

说明书

本发明属于基因检测技术领域，具体涉及一种复合扩增试剂盒及其在生物检材的组织来源鉴定中的应用。本发明通过对人体液中18个基因的转录产物复合扩增检测，特别是对多个基因的信使RNA和环形RNA同时检测，能显著提高被检测基因的敏感性，本发明可广泛应用于法医学生物检材的组织来源鉴定，具有非常高的法医学应用价值。

技术领域

本发明属于基因检测技术领域，涉及一种复合扩增试剂盒及其在生物检材的组织来源鉴定中的应用；尤其涉及一种检测人18个基因的转录产物的复合扩增试剂盒及其应用。

背景技术

在法医学领域，生物检材的组织来源鉴定也称之为体液鉴定，是法医学检测的重要环节。检测实践显示，案件现场遗留的生物检材，如血痕、精斑、阴道分泌物等，它们的组织来源信息有助于推断案件发生过程和重建案件现场，为案件的侦察和审判提供重要证据。

现有技术鉴定生物检材的体液来源的方法很多。早期采用的方法主要是基于酶促反应或免疫学方法，其方法通常快速/简便，但存在需要检材量大、特异性和敏感性差等缺陷，因此，发展新型的体液鉴定技术方法具有非常重要的实用价值和现实意义；目前研究及使用的体液鉴定方法主要有三种，其中，第一种方法是信使RNA检测法，是目前研究最广泛、且已部分应用于法医学案件的鉴定，该方法可以同时提取DNA和RNA，节省检材，可以进行多重复合扩增反应，同时检测多种体液标记分子，短时间内获得更多信息量；然而，信使RNA面临一个容易降解的问题，对于检测陈旧、降解生物检材尚存有局限性；第二种是微小RNA(microRNA)检测法；所述microRNA是一类非编码小分子RNA，长度约18-25个核苷酸，研究表明其不易降解，能解决信使RNA易降解的问题，但是由于microRNA太短，不能进行复合扩增，使得microRNA检测极其不方便；第三种是DNA甲基化标记检测法；DNA甲基化是碱基的复制后共价修饰，是储存表观遗传学信息的主要形式；但此方法消耗DNA，且操作方法比较繁琐，同时机体DNA甲基化受到很多因素影响，如年龄、营养等，这些因素限制了DNA甲基化标记在体液鉴定中的应用。

复合扩增检测是指在一个检测体系里同时检测多个生物标记，能极大地提高检测效率，且节约检材使用量。相比微小RNA检测法和DNA甲基化标记检测法，信使RNA检测不仅可以同时对RNA和DNA共抽提以不影响DNA检测，同时可以利用PCR产物长度差异同时对多个遗传标记进行区分，这使得信使RNA检测具有更加显著的实际应用价值。有研究已筛选出一系列体液特异性的信使RNA标记，也有报道多个基于信使RNA检测的复合扩增试剂盒。