[发明专利]Fc融合蛋白的纯化方法

说明书

本发明公开了一种Fc融合蛋白的纯化方法，涉及生物技术领域。本发明公开的Fc融合蛋白的纯化方法包括将含有Fc融合蛋白的洗脱液的pH值调节至4.9‑5.1。本发明提供的纯化方法可以显著降低产物中的高聚集体Fc融合蛋白，提高Fc融合蛋白的纯度。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体而言，涉及Fc融合蛋白的纯化方法。

背景技术

白细胞介素-10（IL-10）细胞因子，由Mosmannand等于1989年首次报道，是一种多效细胞因子，对免疫系统具有双向调节作用，其通过T细胞、B细胞、巨噬细胞和抗原呈递细胞调节多种免疫应答。一方面，IL-10可通过抑制活化的单核细胞和活化的巨噬细胞中IL-1α，IL-1β，IL-6，IL-8，TNF-α，GM-CSF和G-CSF的表达来抑制主要与炎症相关的免疫应答；另一方面，John B. Mumm等发现IL-10可诱导并刺激肿瘤浸润性CD8⁺T分泌细胞毒细胞因子γ干扰素（IFN-γ），并进一步介导细胞毒物质颗粒酶B（Granzyme B）和穿孔素（perfolin）等的产生，从而抑制并杀伤肿瘤细胞，表现出相应的免疫刺激作用。ARMO BIOSCIENCES, INC.报道了其聚乙二醇化IL-10(PEG-IL-10，AM0010)剂量依赖性抗肿瘤活性。

鉴于IL-10相关疾病，病症和病症的患病率以及严重程度，调节IL-10功能方面的IL-10相关药物具有巨大的治疗价值。

单纯的IL-10分子分子量仅为37KDa左右，很容易在人体内被肾脏等器官代谢，造成其极短的体内半衰期（2~6小时），极大地影响了其疗效。因此有必要通过一定的手段延长其体内半衰期。

Fc融合蛋白（Fc-fusion protein）正是一种延长功能蛋白在体内半衰期的有效方式。

免疫球蛋白G（Immunoglobulin G，IgG）分子主要基于其可结晶片段（Crystallizable fragment，Fc）以pH依赖的方式与新生儿Fc受体（neonatal Fcreceptor，FcRn）结合从而避免被细胞核内体降解，延长单抗的半衰期，这对于改进给药频率，病人的依从性以及成本都有着重要意义。

而Fc融合蛋白通过DNA重组技术将IgG Fc基因与目标蛋白基因重组后，得到的表达产物与重组前目标蛋白相比，其半衰期可被显著延长，同时，由于Fc片段的引入，使得目标蛋白的纯化工艺可以基于Protein A、G等特异性强的亲和层析技术而被大大简化。

采用ProteinA、G类型的高特异性亲和层析技术所收获的Fc融合蛋白易于形成聚集体，如果直接施用于临床，可能将造成临床上更严重的免疫原性，对于生物类重组蛋白药物来讲这是不允许的。

另外的层析纯化方法，如阴、阳离子交换层析，凝胶过滤层析，疏水相互作用层析虽然能在一定程度上去除聚集体。但是使用这类层析纯化方法往往涉及代价高昂的层析设备、层析柱以及层析填料，硬件配置要求较高；同时不可避免地损失部分目标物，造成低于预期的目标物收率，给目标物生产带来困难。其次，基于层析技术的工艺开发过程也极其复杂、繁琐和费时。

鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的目的在于提供一种Fc融合蛋白的纯化方法，以克服上述问题。

本发明是这样实现的：

第一方面，本发明实施例提供一种Fc融合蛋白的纯化方法，其包括：将含有Fc融合蛋白的洗脱液的pH值调节至4.9-5.1。

本发明的发明人发现，采用亲和层析技术纯化Fc融合蛋白中，在洗脱过程中不可避免地涉及到一些极端洗脱条件，例如低pH（一般是pH3.0~3.5，甚至更低如pH2.0~2.7），因此，对于pH等稳定性较差的Fc融合蛋白来说，其往往更易于形成聚集体。