[发明专利]Fc融合蛋白的纯化方法有效
| 申请号： | 201911124845.0 | 申请日： | 2019-11-18 |
| 公开（公告）号： | CN110724204B | 公开（公告）日： | 2021-10-22 |
| 发明（设计）人： | 刘云鹏;芦迪;刘恒嘉 | 申请（专利权）人： | 广东菲鹏制药股份有限公司 |
| 主分类号： | C07K19/00 | 分类号： | C07K19/00;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/22;C07K1/14;C12P21/02 |
| 代理公司： | 北京超凡宏宇专利代理事务所(特殊普通合伙) 11463 | 代理人： | 周文波 |
| 地址： | 523808 广东省东莞*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | fc 融合 蛋白 纯化 方法 | ||
1.一种Fc融合蛋白的纯化方法，其特征在于，其包括：使用初始洗脱液从亲和层析柱上洗脱所述Fc融合蛋白，收集洗脱后的初始洗脱液，以得到含Fc融合蛋白的洗脱液，将含有Fc融合蛋白的洗脱液的pH值调节至4.9-5.1；
其中，所述初始洗脱液的pH值为2-3.5；所述亲和层析柱选自ProteinA或ProteinG；
在收集洗脱后的初始洗脱液时，所用的收集容器中加入有中和缓冲液以使洗脱后的初始洗脱液与所述中和缓冲液混合后的溶液pH为6-7，即得到含有所述Fc融合蛋白的所述洗脱液；
所述Fc融合蛋白由Fc段结构域和功能蛋白结构域组成，所述Fc段结构域与功能蛋白结构域通过Linker连接；所述功能蛋白结构域选自人的IL-10；
所述Fc段结构域选自人IgG4或鼠IgG1。
2.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，所述初始洗脱液的pH值为3.4。
3.根据权利要求2所述的纯化方法，其特征在于，所述中和缓冲液为Tris溶液，pH为7.5-8.5，浓度为0.8-1.2M。
4.根据权利要求3所述的纯化方法，其特征在于，所述初始洗脱液选自醋酸钠溶液、柠檬酸钠溶液和甘氨酸溶液中的任意一种。
5.根据权利要求4所述的纯化方法，其特征在于，所述初始洗脱液为醋酸钠溶液。
6.根据权利要求5所述的纯化方法，其特征在于，所述醋酸钠溶液的浓度为18-22mM。
7.根据权利要求3所述的纯化方法，其特征在于，所述纯化方法还包括：在使用所述初始洗脱液进行洗脱前，先用PBS缓冲液清洗所述亲和层析柱；
所述PBS缓冲液为：9-11mM PB，140-160mM NaCl，pH为7.2-7.4。
8.根据权利要求7所述的纯化方法，其特征在于，所述纯化方法还包括：将含有所述Fc融合蛋白的发酵上清液施加于所述亲和层析柱。
9.根据权利要求8所述的纯化方法，其特征在于，所述发酵上清液由可表达所述Fc融合蛋白的宿主细胞发酵得到。
10.根据权利要求9所述的纯化方法，其特征在于，所述宿主细胞为哺乳动物细胞；所述哺乳动物细胞选自HEK293或CHO。
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