[发明专利]一种液体生物样品中选择性去除宿主核酸的方法在审
| 申请号： | 201911121617.8 | 申请日： | 2019-11-15 |
| 公开（公告）号： | CN112813137A | 公开（公告）日： | 2021-05-18 |
| 发明（设计）人： | 江山;庞白冰 | 申请（专利权）人： | 西安中科茵康莱医学检验有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6806 | 分类号： | C12Q1/6806;C12Q1/04 |
| 代理公司： | 成都弘毅天承知识产权代理有限公司 51230 | 代理人： | 尹洁芳 |
| 地址： | 710019 陕*** | 国省代码： | 陕西;61 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 液体 生物 样品 选择性 去除 宿主 核酸 方法 | ||
1.一种液体生物样品中选择性去除宿主核酸的方法，其特征在于：所述方法包括如下步骤：
(1)将液体生物样品与皂苷溶液混合均匀，室温下静置5-30分钟，得混合物，混合物中皂苷的终浓度为0.02-1.7％；
(2)将混合物高速离心，离心后倒掉上清液，得到第一沉淀；
(3)向第一沉淀中加入核酸酶反应液和核酸酶，核酸酶包含10-200个酶单位；
(4)将核酸酶灭活；
(5)富集目标微生物2。
2.根据权利要求1所述的一种液体生物样品中选择性去除宿主核酸的方法，其特征在于：步骤(3)后富集目标微生物1，使用水和/或生物缓冲液冲洗目标微生物1，之后进行步骤(4)。
3.根据权利要求2所述的一种液体生物样品中选择性去除宿主核酸的方法，其特征在于：生物缓冲液包括PBS、TE、TBE、TAE、Tris-glycine缓冲液中的一种。
4.根据权利要求1所述的一种液体生物样品中选择性去除宿主核酸的方法，其特征在于：步骤(1)中混合物中皂苷的终浓度为0.04-0.85％。
5.根据权利要求1所述的一种液体生物样品中选择性去除宿主核酸的方法，其特征在于：步骤(2)中离心的转速为4000–10000rpm，时间为20-30分钟。
6.根据权利要求1所述的一种液体生物样品中选择性去除宿主核酸的方法，其特征在于：步骤(3)中核酸酶包含50-150个酶单位。
7.根据权利要求2所述的一种液体生物样品中选择性去除宿主核酸的方法，其特征在于：重复步骤(3)至少一次。
8.根据权利要求7所述的一种液体生物样品中选择性去除宿主核酸的方法，其特征在于：重复步骤(3)2次。
9.权利要求1-8任一项所述的一种液体生物样品中选择性去除宿主核酸的方法在制备诊断试剂盒中的用途。
10.根据权利要求9所述的用途，其特征在于：所述诊断试剂盒用于在液体生物样品中分离目标微生物和/或分离目标微生物的核酸，所述液体生物样品包括目标微生物、非靶标细胞和任选存在的目标微生物和/或非靶标细胞的碎片，所述诊断试剂盒包括至少一种皂苷制剂，至少一种能够裂解核酸的酶，EDTA和/或EGTA和/或DTT和/或β-巯基乙醇和/或DEPC和/或胍。
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