[发明专利]一种重组β-葡萄糖苷酶CB-3B及其在生产人参皂苷Rg3中的应用

说明书

本发明公开了一种重组β‑葡萄糖苷酶CB‑3B及其在生产人参皂苷Rg3中的应用。重组β‑葡萄糖苷酶CB‑3B的氨基酸序列如SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：4所示。实验证明，蛋白质CB‑3B为β‑葡萄糖苷酶，能够水解结合于末端非还原性的β‑D‑葡萄糖键，同时释放出β‑D‑葡萄糖和相应的配基。利用蛋白质CB‑3B和糖苷水解酶水解人参皂苷Rb1，可以生产人参皂苷Rg3。本发明具有重要应用价值。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种重组β-葡萄糖苷酶CB-3B及其在生产人参皂苷Rg3中的应用。

背景技术

人参皂苷Rg3具有良好的抗肿瘤、抗炎等药理学活性，潜在的应用价值很高。然而人参皂苷Rg3在人参中含量较低，从人参中提取进行工业化制备十分困难，因此，人参皂苷Rg3的应用受到限制。

人参皂苷Rb1在人参总皂苷中的含量高达15％以上，在西洋参总皂苷和三七总皂苷中的含量则高达25％和30％。人参皂苷Rb1和人参皂苷Rg3具有相同的苷元结构，只是连接在苷元C20位置上的糖基数目有所不同。因此，可以通过水解人参皂苷Rb1分子中C20位上的葡萄糖基，来获得人参皂苷Rg3。其中酸水解的专一性差，副产物多，产率低，产品的分离纯化比较困难。生物转化具有条件温和、专一性好、产率高、污染小等优点，是制备人参皂苷Rg3的理想方法。

发明内容

本发明的目的是制备人参皂苷Rg3。

本发明首先保护一种蛋白质CB-3B，可为如下a1)或a2)或a3)或a4)：

a1)氨基酸序列是SEQ ID NO：2所示的蛋白质；

a2)在SEQ ID NO：2所示的蛋白质的N端或/和C端连接标签得到的融合蛋白质；

a3)氨基酸序列是SEQ ID NO：4所示的蛋白质；

a4)将a1)或a2)或a3)所示的蛋白质经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加得到的具有β-葡萄糖苷酶活性的蛋白质。

其中，SEQ ID NO：2可由765个氨基酸残基组成；SEQ ID NO：4可由785个氨基酸残基组成。

为了使a1)中的蛋白质便于纯化，可在SEQ ID NO：2所示的蛋白质的氨基末端或羧基末端连接上如表1所示的标签。

表1.标签的序列

上述a4)中的蛋白质，所述一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加为不超过10个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加。

上述a4)中的蛋白质可人工合成，也可先合成其编码基因，再进行生物表达得到。

上述a4)中的蛋白质的编码基因可通过将SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：3所示的DNA序列中缺失一个或几个氨基酸残基的密码子，和/或进行一个或几个碱基对的错义突变，和/或在其5′端和/或3′端连上表1所示的标签的编码序列得到。

编码所述蛋白质CB-3B的核酸分子也属于本发明的保护范围。

所述编码蛋白质CB-3B的核酸分子可为如下b1)或b2)或b3)或b4)所示的DNA分子：

b1)编码区SEQ ID NO：1所示的DNA分子；

b2)核苷酸序列是SEQ ID NO：1所示的DNA分子；

b3)核苷酸序列是SEQ ID NO：3所示的DNA分子；