[发明专利]一种基于重组酶聚合酶扩增方法检测大豆根腐病的引物探针组合物、试剂盒及其应用有效
| 申请号： | 201911114898.4 | 申请日： | 2019-11-14 |
| 公开（公告）号： | CN110804674B | 公开（公告）日： | 2022-07-15 |
| 发明（设计）人： | 窦道龙;沈丹宇;张正光;张海峰;逯欣宇 | 申请（专利权）人： | 南京农业大学 |
| 主分类号： | C12Q1/6895 | 分类号： | C12Q1/6895;C12Q1/6844;C12Q1/6804;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/645 |
| 代理公司： | 南京天华专利代理有限责任公司 32218 | 代理人： | 徐冬涛;李晓峰 |
| 地址： | 211225 江苏省南京市溧*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 基于 重组 聚合 扩增 方法 检测 大豆 根腐病 引物 探针 组合 试剂盒 及其 应用 | ||
1.一种基于重组酶聚合酶扩增方法检测终极腐霉的引物探针组合物，其特征在于，该引物探针组合物由正向引物PuRPA-F、反向引物PuRPA-R和探针PuProbe组成，各引物和探针的序列如下所示：
正向引物PuRPA-F：TTCACGATGTATGGAGACGCTGCATTTAGTTG
反向引物PuRPA-R：Biotin-TCCTCCGCTTATTGATATGCTTAAGTTCAG
探针PuProbe：FAM-TATCATTGTCAATTGCAAGATTGTGTATGG-THF-ATCTCAATTGGACCT-C3spacer。
2.权利要求1所述的引物探针组合物在制备用于检测终极腐霉的试剂盒中的应用。
3.一种基于重组酶聚合酶扩增方法检测终极腐霉的试剂盒，其特征在于，该试剂盒中包含权利要求1所述的引物探针组合物。
4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，该试剂盒中各试剂的浓度和用量为：2.1μL 10 μM的正向引物PuRPA-F、2.1 μL 10 μM的反向引物PuRPA-R、0.6 μL 10 μM的探针PuProbe、29.5 μL Rehydration Buffer、12.2 μL DEPC处理水、2.5 μL 280 mM MgAC和酶干粉，配成49 μL的反应体系。
5.权利要求3或4所述的试剂盒在检测终极腐霉中的应用。
6.权利要求1所述的引物探针组合物在检测终极腐霉中的应用。
7.一种基于重组酶聚合酶扩增方法检测终极腐霉的方法，其特征在于：提取待检测样品的基因组DNA作为反应模板，采用权利要求4所述的试剂盒进行重组酶聚合酶扩增，然后使用侧流层析试纸条检测扩增产物，判断检测结果：当检测线和控制线上都出现指示带时，则表示待测病菌为终极腐霉。
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于：该方法的具体工艺参数为：提取待检测样品的基因组DNA，取1 μL待检微生物的DNA作为反应模板，加入49 μL权利要求4所述的试剂盒中的反应体系进行重组酶聚合酶扩增，反应程序为：39℃反应扩增20 min。
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