[发明专利]一种利用响应曲面法优化玄参多糖硫酸酯化的工艺

说明书

本发明涉及一种利用响应曲面法优化玄参多糖硫酸酯化的工艺，包括以下步骤：⑴样品制备：将玄参的干燥根制成玄参多糖粉末；然后按不同的反应温度、反应时间、酯化试剂比例进行反应提取，得到对应于不同比例酯化试剂的玄参多糖硫酸酯粉末；⑵用氯化钡‑明胶比浊法测定样品取代度；⑶样品ABTS⁺清除率的测定；⑷实验设计与统计分析：①单因素试验：②响应面法优化设计：根据单因素试验结果，以反应温度、反应时间、酯化试剂比例作为考察因素建立多元二次回归方程：⑸实验结果分析与优化：利用Design Expert 8.0.6软件根据多元二次回归方程进行绘图分析，得到回归方程的响应面及其等高线图。本发明操作简单、提取率高。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种利用响应曲面法优化玄参多糖硫酸酯化的工艺。

背景技术

玄参（ScrophulariaeRadix）为玄参科（Scrophulariaceae）植物玄参（Scrophularia ningpoensis Hemsl.）的干燥根。主产于浙江、湖北、江苏、江西等省，其中以浙江出产的玄参为佳品，公认为浙八味之一。其味甘、苦、咸，微寒，具有清热凉血、泻火解毒、滋阴降火等功效，多用于热入营血、温毒发斑、热病伤阴、舌绛烦渴，津伤便秘等症。目前认为其主要化学成分有环烯醚萜类、苯丙素苷类、苯乙醇苷类、甾醇类、黄酮类及多糖类等化学成分，具有镇痛、抗疲劳、抗炎、抑菌、保护心肌、抗血凝、抗脑缺血损伤，增强免疫等药理作用，临床上常用玄参治疗阴虚血瘀型冠心病心绞痛。

中药多糖作为天然大分子化合物，具有提取来源广泛且基本无细胞毒性的特点。目前国内对于中药多糖的研究十分广泛，如人参多糖、黄芪多糖、大枣多糖、灵芝多糖等；研究方向上主要集中于提取工艺优化、分离纯化工艺研究、组分结构分析、体内外抗氧化活性及药理于免疫活性等部分。大量报道表明，中药多糖具有良好的抗肿瘤、抑菌抗病毒、抗氧化衰老、免疫调节及降血糖等作用。

随着人们对多糖成分活性的深入研究，多糖结构修饰成为提高多糖生物活性或其生物利用度的重要方法之一。目前常见的多糖结构修饰方法有羧甲基化、乙酰化、硫酸酯化、硒化、烷基化等修饰方法。经结构修饰后的多糖衍生物在很多方面都显示出较高的活性。

硫酸酯化多糖即多糖通过硫酸化修饰得到的衍生物，包括自然界存在的天然多糖硫酸酯和经人工合成的多糖硫酸酯衍生物。目前发现的天然的多糖硫酸酯如硫酸软骨素、肝素等，均具有非常良好的药理活性。通过对多糖的硫酸酯化结构修饰，可提高多糖抗氧化、抗肿瘤、免疫调节，抗菌抗病毒等功能。目前常采用Wblform法硫酸酯化吡喃型多糖，Nagasawa法常用于吠喃型多糖。多糖硫酸酯化常见方法有氯磺酸-吡啶法、三氧化硫-吡啶法、浓硫酸法、氯磺酸-DMF法等。虽然三氧化硫-吡啶法和浓硫酸法操作简单，但衍生物取代度低且产品回收率也较低；氯磺酸-吡啶法操作繁琐，反应周期长，但产品取代度较高，且方便回收。

如Wang等证明枸杞多糖硫酸酯可显著促进细胞增殖，同时提高HI抗体效价，增强LBPS免疫活性（Wang J M, Hu Y L, Wang D Y, et al. Sulfated Modification canenhance the immune-enhancing activity of lycium barbarum polysaccharide [J].Cell Immunol, 2010, 263 (2): 219-23.）。Zhao等发现经硫酸酯化修饰的银耳多糖可显著增强脾淋巴细胞的体外增殖能力（Zhao X N, Hu Y L, Wang D Y. The comparison ofimmune-enhancing activity of sulfated polysaccharides from Tremella andCondonpsis pilosula [J]. Carbohydr Polym, 2013, 98 (1): 438-443.）。