[发明专利]CYP2D6*10基因的SYBR Green I检测引物、试剂盒及检测方法

说明书

本发明提供了一种CYP2D6*10基因的SYBR Green I检测引物、试剂盒及检测方法，其中检测引物包括CYP2D6*10野生型上游引物、CYP2D6*10突变型上游引物、CYP2D6*10野生型和CYP2D6*10突变型通用下游引物，所述CYP2D6*10野生型上游引物核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，CYP2D6*10突变型上游引物核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示，通用下游引物核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示。本申请通过所述检测引物及包含该引物的试剂盒，直接探索PCR过程中荧光信号值从而获得检测的结果，不需要PCR后处理或电泳检测，克服了常规PCR技术的易污染、出现假阳性的技术问题，能有效避免出现非特异性扩增难题，适合大批量样本的检测。该方法灵敏度高、特异性强，可以指导多种病症患者根据个体的基因组信息实现个体化用药。

技术领域

本发明涉及医学和生物技术领域，尤其涉及一种CYP2D6*10基因的SYBR Green I检测引物、试剂盒及检测方法。

背景技术

细胞色素P450(CYP)家族是药物Ⅰ相代谢酶中一种重要的酶系，在生物体内的内源性物质和外源性物质的代谢中发挥重要作用。CYP2D6基因是CYP酶家族重要的成员之一，虽然只占肝脏酶总量的2～9％，却参与20～30％药物的代谢，包括抗抑郁药、抗心律失常药、抗精神病药、镇痛药等。不同个体CYP2D6的活性最大可相差1000倍，在中国人群中最常见的多态性为CYP2D6*10，约51.6％的中国人携带此遗传变异，该多态性导致CYP2D6的酶活性降低，且极不稳定，从而影响药物代谢。

通过对患者的CYP2D6基因进行检测，得到特定位点的基因型，以基因型的检测结果来确定药物的选择，就可以实现个体化用药，避免对免疫抑制剂不良反应。

目前常用的CYP2D6*10基因多态性检测方法主要采用Taqman荧光探针法法。但Taqman荧光探针法灵敏度低、假阳性率高、耗时较长，通量小。因此，需要一种新的CYP2D6*10基因多态性检测试剂盒及检测方法，使得对CYP2D6*10基因多态性检测的灵敏度高，假阳性率高，且检测周期短。

发明内容

为了克服现有技术的上述不足，本发明提出一种CYP2D6*10基因的SYBR Green I检测引物、试剂盒及检测方法。为了达到上述目的，本发明是通过以下技术方案实现的：

为实现上述目的，本发明是通过以下技术方案实现的：

本发明的第一个目的是提出一组CYP2D6*10基因的SYBR Green I检测引物，包括CYP2D6*10野生型上游引物、CYP2D6*10突变型上游引物、CYP2D6*10野生型和CYP2D6*10突变型通用下游引物，所述CYP2D6*10野生型上游引物核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，CYP2D6*10突变型上游引物核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示，通用下游引物核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示。

本发明的第二个目的是提出一种CYP2D6*10基因的SYBR Green I检测试剂盒，所述试剂盒包括上述的一组CYP2D6*10基因的SYBR Green I检测引物。

进一步地，所述试剂盒还包括从待检测样本中提取DNA的样本处理试剂、PCR缓冲液、DNA聚合酶、阴性对照品、阳性对照品、显色试剂。

更进一步地，所述阳性对照品包括CYP2D6*10野生型阳性对照和CYP2D6*10突变型阳性对照，所述CYP2D6*10野生型阳性对照和CYP2D6*10突变型阳性苷酸序列依次如SEQ IDNO：4～SEQ ID NO：5所示。

更进一步地，CYP2D6*10基因的突变型阳性对照包含CYP2D6*10基因突变型阳性模板序列，所述CYP2D6*10基因突变型阳性模板序列为由CYP2D6*10基因突变型上游引物与CYP2D6*10基因公共下游引物扩增出的PCR产物。