[发明专利]CYP2D6*10基因的SYBR Green I检测引物、试剂盒及检测方法

权利要求书

1.一组CYP2D6*10基因的SYBR Green I检测引物，其特征在于，包括CYP2D6*10野生型上游引物、CYP2D6*10突变型上游引物、CYP2D6*10野生型和CYP2D6*10突变型通用下游引物，所述CYP2D6*10野生型上游引物核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，CYP2D6*10突变型上游引物核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示，通用下游引物核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示。

2.一种CYP2D6*10基因的SYBR Green I检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1所述的一组CYP2D6*10基因的SYBR Green I检测引物。

3.根据权利要求2所述的一种CYP2D6*10基因的SYBR Green I检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括从待检测样本中提取DNA的样本处理试剂、PCR缓冲液、DNA聚合酶、阴性对照品、阳性对照品、显色试剂。

4.根据权利要求3所述的一种CYP2D6*10基因的SYBR Green I检测试剂盒，其特征在于，所述阳性对照品包括CYP2D6*10野生型阳性对照和CYP2D6*10突变型阳性对照，所述CYP2D6*10野生型阳性对照和CYP2D6*10突变型阳性苷酸序列依次如SEQ ID NO：4～SEQ IDNO：5所示。

5.根据权利要求4所述的一种CYP2D6*10基因的SYBR Green I检测试剂盒，其特征在于，CYP2D6*10基因的突变型阳性对照包含CYP2D6*10基因突变型阳性模板序列，所述CYP2D6*10基因突变型阳性模板序列为由CYP2D6*10基因突变型上游引物与CYP2D6*10基因公共下游引物扩增出的PCR产物。

6.根据权利要求4所述的一种CYP2D6*10基因的SYBR Green I检测试剂盒，其特征在于，CYP2D6*10基因的野生型阳性对照包含CYP2D6*10基因野生型阳性模板序列，所述CYP2D6*10基因野生型阳性模板序列为由CYP2D6*10基因野生型上游引物与CYP2D6*10基因公共下游引物扩增出的PCR产物。

7.一种基于权利要求2-6任一项所述试剂盒的CYP2D6*10基因的SYBR Green I检测方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)获取样本基因组DNA；

(2)以样本基因组DNA为模板，利用SYBRGreen Ⅰ染料法分别对CYP2D6*10基因的野生型反应体系和突变反应体系的实时荧光PCR扩增；

(3)数据采集和分析：将阈值线调整至背景信号及阴性扩增线以上，通过实时荧光PCR仪收集信号，计算所述野生型反应体系和突变型反应体系的ΔCt值来确定所述样品的DNA的基因型。

8.根据权利要求7所述的检测方法，其特征在于，所述实时荧光PCR扩增程序为：94℃6min；94℃15s，60℃40s，40个循环，62℃收集荧光信号；94℃15s，60℃1min，94℃30s，62℃15s。

9.根据权利要求7所述的检测方法，其特征在于，所述步骤3)中按照以下判断标准确定所述样品DNA的基因型：

-2.5≤ΔCt＝野生型Ct值-突变型Ct值≤3，判定为杂合型样本；

ΔCt＝突变型Ct值-野生型Ct值＞2.5，判定为野生型样本；

ΔCt＝野生型Ct值-突变型Ct值＞3，判定为突变型样本。