[发明专利]一种与猪产仔数相关的cricTCP1标记应用

权利要求书

1.标记基因circ-TCP1对miR-183调控在母猪产仔能力判断方面的应用，其特征在于，所述circ-TCP1基因与miR-183的表达呈反向相关；所述circ-TCP1与母猪产仔能力呈负相关，miR-183与母猪产仔能力呈正相关。

2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，该应用通过分析circ-TCP1表达水平判断母猪产仔能力大小。

3.如权利要求1所述的应用，其特征在于，该应用通过分析miR-183表达水平判断母猪产仔能力大小。

4.如权利要求1所述的应用，其特征在于，该应用通过分析circ-TCP1和miR-183表达水平在母猪产仔能力判断方面的应用。

5.如权利要求1-4任一项所述的应用，其特征在于，该应用方法具体包括如下步骤：

(1)组织RNA提取：提取不同个体母猪卵巢或血液中RNA，用三唑仑试剂(invitrogen)纯化RNA，得到总RNA；

(2)引物设计：根据待分析目标基因分别设计候选基因circ-TCP1的qPCR引物circ-TCP1、miR-183的qPCR引物β-actin；

(3)反转录合成第一链cDNA：使用反转录试剂盒对反转录步骤(1)得到的总RNA，合成第一链cDNA；

(4)采用q-RT-PCR方法测定候选基因circ-TCP1、miR-183在母猪卵巢或血液中的相对表达量；

(5)根据circ-TCP1在卵巢和血液中的表达量，miR-183在卵巢和血液中的表达量，判断不同母猪个体之间产仔能力相对高低。

其中，引物circ-TCP1的上游序列为：GGGACCTTAAACGCATTGCTA，下游序列为：GGTCCAGTTTTTCAGGGTCTGT；产物长度147bp；

引物β-actin的上游序列为GGACTTCGAGCAGGAGATGG；下游序列：AGGAAGGAGGGCTGGAAGAG；产物长度134bp。

6.如权利要求5所述的应用，其特征在于，步骤(3)中反转录的具体操作为：将总RNA样品用Epicenter Ribo-Zero rRNA去除试剂盒去除核糖体RNA，然后用二价阳离子在94℃孵育8分钟，将核糖体缺失的RNA碎片化为150-200℃，将切割后的RNA片段用End-It DNA EndRepair Kit处理cDNA以修复末端，然后用Klenow修饰以在3'末端添加A，最后连接到索引的衔接子上；纯化连接的cDNA产物并用尿嘧啶DNA糖基化酶处理以除去第二链cDNA；通过13-16个PCR扩增循环富集纯化的第一链cDNA。

7.如权利要求5所述的应用，其特征在于，步骤(4)所述q-RT-PCR方法中反应过程为：95℃30秒，然后95℃5秒，60℃30秒，40个循环，70℃10分钟伸长。