[发明专利]一种适用于秸秆微贮的乳酸菌菌剂及其制备工艺

权利要求书

1.一种适用于秸秆微贮的乳酸菌菌剂，其特征在于，所述的乳酸菌菌剂是植物乳杆菌和屎肠球菌的混合冻干粉，所述的植物乳杆菌的菌株于2015年2月4日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.10516；所述屎肠球菌的菌株于2018年05月31日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.15833；所述植物乳杆菌菌株和屎肠球菌菌株的保藏地址都为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所。

2.根据权利要求1所述的适用于秸秆微贮的乳酸菌菌剂，其特征在于，该乳酸菌菌剂的有效活菌数为4.80×10¹¹CFU/g。

3.根据权利要求1或2所述的适用于秸秆微贮的乳酸菌菌剂，其特征在于，该乳酸菌菌剂的制备工艺包括如下步骤：

(1)对植物乳杆菌和屎肠球菌分别使用发酵罐进行规模化培养；

(2)利用离心机分别对2种菌体培养液进行分离，收集菌体形成菌泥；

(3)植物乳杆菌菌泥和屎肠球菌菌泥按照活菌数2:1.5-2的比例进行混合；

(4)以非脂乳固体含量≥8.5％的脱脂纯牛奶作为介质与保护剂混合成为复合保护剂，该复合保护剂与2种菌的混合菌泥按照体积比1-1.5:1进行充分地混合；

(5)混匀后的菌泥液体分装到2000ml冻干盘中，每个冻干盘中分装800-1000ml菌泥液体，-30℃～-40℃预冷冻2h，然后转入冻干机中冻干；

所述复合保护剂除脱脂牛奶外各组分及其终浓度分别为0.4-0.6％Vc、3.0-5.0％甘油、7.0-9.0％蔗糖、4.0-6.0％谷氨酸，并调节PH值至7.5；

所述冻干机冻干工艺参数为：-30℃ 30min，-20℃ 1h，-10℃ 20h，-5℃ 2.5h，0℃2.5h，5℃ 1h，10℃ 1h，15℃ 1h，25℃ 4h。

4.根据权利要求3所述的适用于秸秆微贮的乳酸菌菌剂，其特征在于，所述步骤(1)中植物乳杆菌的规模化培养包括如下步骤：

中试在装量350L的500L发酵罐中进行培养，以MRS为初始培养基，在0.5Kgf/cm²下灭菌30min，在培养基温度低于38℃时接种，接种量0.5％，保温37℃静止培养，培养过程中前16h每4h搅拌5min，以后每2h搅拌一次，培养过程16h与24h 2次补料至总糖质量浓度8.0％，同步直接补充混合氮源质量浓度至8.0％，培养过程中使用氢氧化钠三次调整pH到6.0-6.5，培养在40h～41h时结束。

5.根据权利要求3所述的适用于秸秆微贮的乳酸菌菌剂，其特征在于，所述步骤(1)中屎肠球菌的规模化培养包括如下步骤：

中试在装量350L的500L发酵罐中进行，MRS培养基装量350L，在0.5kgf/cm²蒸汽压力下灭菌30min，待培养基温度降至40℃以下时0.5％接种量接种，控制温度36-38℃，静止培养，使用30％氢氧化钠在16h、24h时分别调整pH到6.0-6.8，培养时间32h。

6.根据权利要求3所述的适用于秸秆微贮的乳酸菌菌剂，其特征在于，所述步骤(2)中2种菌体培养液分别经管式离心机分离，转速为16000r/min，分别收集菌泥。

7.根据权利要求3所述的适用于秸秆微贮的乳酸菌菌剂，其特征在于，所述步骤(4)中复合保护剂与2种菌的混合菌泥按照体积比1:1进行充分地混合。

8.根据权利要求3所述的适用于秸秆微贮的乳酸菌菌剂，其特征在于，所述步骤(5)中每个冻干盘中分装900ml菌泥液体。

9.根据权利要求3所述的适用于秸秆微贮的乳酸菌菌剂，其特征在于，所述复合保护剂除脱脂牛奶外各组分终浓度分别为0.5％Vc、4.0％甘油、8.0％蔗糖、5.0％谷氨酸，并调节PH值至7.5。