[发明专利]一锅法生产莱鲍迪苷D的方法有效
| 申请号： | 201911097269.5 | 申请日： | 2019-11-11 |
| 公开（公告）号： | CN110846363B | 公开（公告）日： | 2023-02-17 |
| 发明（设计）人： | 马媛媛;宋浩;洪解放;汪振洋;来庆英;张敏华 | 申请（专利权）人： | 天津大学;中化健康产业发展有限公司 |
| 主分类号： | C12N9/10 | 分类号： | C12N9/10;C12P19/56;C12N15/54;C12N1/21;C12N1/19;C12R1/865;C12R1/84;C12R1/125 |
| 代理公司： | 天津市北洋有限责任专利代理事务所 12201 | 代理人： | 曹玉平 |
| 地址： | 300072*** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一锅 生产 莱鲍迪苷 方法 | ||
1.一锅法生产莱鲍迪苷D的方法，其特征是包括如下步骤：
(1)构建能分泌表达糖基转移酶UGT1的重组菌1，所述糖基转移酶UGT1的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述重组菌1用下述步骤构建：表达所述糖基转移酶UGT1的基因的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO.2所示；所述基因连接至pPICZalphaA，获得序列表中SEQ IDNO.3所示的4954bp的pP-UGT1质粒；所述pP-UGT1质粒包含SEQ ID NO.6所示的分泌表达糖基转移酶UGT1所用的信号肽alpha因子的核苷酸序列；所述pP-UGT1质粒转化大肠杆菌TOP10F′得到的转化子，并从转化子中提取pPIC-UGT1质粒；用PmeI酶切成线性的SEQ IDNO.3所示的4954bp片段，将4954bp片段与巴斯德毕赤酵母宿主菌的感受态细胞混匀，进行电击转化，获得重组菌1；
(2)在pH3.5-7.8的培养基中培养重组菌1,得到培养液；
(3)在步骤(2)获得的培养液中加入底物莱鲍迪苷A，加入尿苷二磷酸葡萄糖，硫酸镁或氯化镁，甲醇，反应，得到莱鲍迪苷D。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征是步骤(3)为：在步骤(2)获得的培养液中加入终浓度为0.3-20g/L的底物莱鲍迪苷A，加入终浓度为0.2-1.5mM的尿苷二磷酸葡萄糖，加入终浓度为0.5-5mM的硫酸镁或氯化镁，每24小时加入终浓度为0.5％-1.5％的甲醇，反应，得到莱鲍迪苷D。
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