[发明专利]一种鉴别龙血树品种的PCR方法有效
| 申请号： | 201911097106.7 | 申请日： | 2019-11-11 |
| 公开（公告）号： | CN110804672B | 公开（公告）日： | 2023-03-21 |
| 发明（设计）人： | 王延谦;李爽;杨春勇;王艳芳;里二;张丽霞;李戈;彭建明;严珍;李荣英 | 申请（专利权）人： | 中国医学科学院药用植物研究所云南分所 |
| 主分类号： | C12Q1/6895 | 分类号： | C12Q1/6895;C12Q1/686;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京慕达星云知识产权代理事务所(特殊普通合伙) 11465 | 代理人： | 赵徐平 |
| 地址： | 666100 云南省*** | 国省代码： | 云南;53 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 鉴别 龙血树 品种 pcr 方法 | ||
1.一种鉴别龙血树品种的PCR方法，其特征在于，包括下述步骤：
1）提取基因组DNA和总RNA；分别对3种龙血树的基因组提取DNA和RNA，所述三种龙血树为剑叶龙血树、海南龙血树和岩棕；
2）反转录：将步骤1）得到的总RNA反转录得到cDNA；
3）基因克隆：利用PAL-F和PAL-R引物对步骤1）得到的3种基因组DNA和步骤2）获得的cDNA进行扩增，电泳并回收目的基因；
其中，PAL-F：5’-GCCTAAACAAGACAGGTACGCC-3’，如SEQ ID NO.1所示；
PAL-R:5’-GCAAGGGTCGTCAATGTAGGTG-3’，如SEQ ID NO.2所示；
4）转化、测序：将步骤3）得到的目的基因转化至大肠杆菌DH5α，选取阳性克隆进行测序；
5）比对：根据测序结果，比对三种龙血树中PAL基因序列的差异；其中，扩增产物中碱基位置222 bp、408 bp、598 bp、633 bp、661 bp处对应的碱基分别为G、C、G、G、G的是剑叶龙血树，分别为C、T、G、G、C的是海南龙血树，分别为G、T、T、T、G的是岩棕。
2.根据权利要求1所述的一种鉴别龙血树品种的PCR方法，其特征在于，步骤1）中，以Plant Genomic DNA Kit试剂盒提取剑叶龙血树、海南龙血树和岩棕的基因组DNA。
3.根据权利要求1所述的一种鉴别龙血树品种的PCR方法，其特征在于，步骤1）中，以RNAprep Pure Plant Kit试剂盒提取剑叶龙血树、海南龙血树和岩棕的茎干中的总RNA。
4.根据权利要求1所述的一种鉴别龙血树品种的PCR方法，其特征在于，步骤2）中，以RecertAcid First Stand cDNA Synthssis Kit试剂盒合成cDNA。
5.根据权利要求1所述的一种鉴别龙血树品种的PCR方法，其特征在于，步骤3）中，扩增程序为：
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